IGF-1 LR3

L означает Long (длинный): дополнительные 13 аминокислот в начале. R3 означает, что аргинин находится в позиции 3 вместо глутаминовой кислоты. Вместе они предотвращают связывание IGF с белками-носителями.

Оба активируют рецептор IGF-1. Нативный IGF-1 в основном удерживается связывающими белками и действует кратковременно. LR3 связывается с этими белками гораздо слабее, поэтому остается свободным и активным значительно дольше.

Гормон роста действует в основном за счет стимуляции выработки IGF-1 в печени, а также за счет собственных эффектов. IGF-1 LR3 пропускает этот этап и воздействует на рецептор IGF-1 напрямую.

Оба избегают связывающих белков. LR3 делает это за счет более длинной цепи и действует дольше. IGF-DES представляет собой IGF-1 без первых трех аминокислот и действует более короткое время.

Десять герметичных флаконов лиофилизированного IGF-1 LR3 из одной партии, по 0,1 мг или 1 мг во флаконе. Один отчет о партии распространяется на все десять флаконов.

IGF-1 LR3 поставляется в виде лиофилизированного порошка в герметичных флаконах, который остается стабильным при комнатной температуре во время транспортировки. Каждый заказ отправляется в простой упаковке с отслеживанием, и большинство заказов прибывают в течение 7-14 дней. После получения храните в морозильной камере при -20°C. Сертификат анализа для партии, которую мы отправляем сейчас, находится на нашей странице с результатами лабораторных исследований.

Наш IGF-1 LR3 превышает чистоту >98%, подтвержденную ВЭЖХ, с комплексным контролем качества для этого модифицированного фактора роста из 83 аминокислот. Каждая партия проходит: обращенно-фазовую ВЭЖХ, демонстрирующую чистоту >98% с временем удерживания, характерным для удлиненного аналога LR3 из 83 АК; подтверждение молекулярной массы методом масс-спектрометрии для модифицированной структуры IGF-1 (ожидаемая масса ~9117 Да для варианта LR3 из 83 аминокислот против ~7649 Да для нативного IGF-1 из 70 АК); верификацию аминокислотной последовательности, подтверждающую N-концевое удлинение из 13 аминокислот и замену глутаминовой кислоты на аргинин в позиции 3 с помощью фрагментации МС/МС или деградации по Эдману; валидацию модификации, обеспечивающую правильное включение Arg3 и точность N-концевого удлинения; биоанализы связывания с рецептором IGF-1, измеряющие аффинность IGF-1 LR3 к IGF-1R с использованием конкурентных анализов рецепторов или клеточных исследований связывания (Kd обычно в низком наномолярном диапазоне, сопоставимо с нативным IGF-1, несмотря на структурные модификации); анализы связывания с IGFBP, демонстрирующие сниженную аффинность - сравнение связывания IGF-1 LR3 и нативного IGF-1 с IGFBP-3 и другими IGFBP с помощью поверхностного плазмонного резонанса или конкурентных анализов, подтверждающее снижение в 100-1000 раз, что валидирует модификации Arg3/удлинение; биоанализы клеточной пролиферации с использованием миобластов, фибробластов или других клеток, чувствительных к IGF-1, измеряющие дозозависимую пролиферацию (анализы MTT/BrdU), демонстрирующие функциональную активацию IGF-1R; анализы фосфорилирования AKT и MAPK - обработка клеток IGF-1 LR3 и измерение pAKT (Ser473) и pERK1/2 с помощью вестерн-блоттинга, подтверждающая активацию путей PI3K-AKT-mTOR и RAS-MAPK; анализы синтеза белка с использованием включения [3H]-лейцина или пуромицина, измеряющие стимулированную IGF-1 LR3 трансляцию, подтверждающую анаболическую сигнализацию; тестирование на эндотоксины (<0,1 ЕЭ/мг) и комплексный Сертификат анализа. Чистота >98% обеспечивает воспроизводимую активацию IGF-1R, стабильные пролиферативные/анаболические реакции и надежные исследования роста мышц. Контроль качества валидирует химическую идентичность (последовательность из 83 АК с Arg3 и N-концевым удлинением), сниженное связывание с IGFBP (ключевая функциональная модификация) и биологическую активность (сигнализация IGF-1R, клеточная пролиферация, синтез белка), необходимые для исследований аналогов IGF-1.

Помимо химической чистоты (HPLC >98%, масс-спектрометрия, подтверждающая структуру из 83 аминокислот с Arg3 и N-концевым удлинением), мы проводим комплексные анализы связывания рецепторов и IGFBP: (1) Анализы связывания рецептора IGF-1: с использованием клеток, экспрессирующих IGF-1R (миобласты, фибробласты или клеточные линии, трансфицированные IGF-1R), измеряем способность IGF-1 LR3 конкурировать с меченым радиоактивным IGF-1 за связывание с рецептором (конкурентные анализы связывания) или напрямую связываться с IGF-1R (насыщающее связывание с определением аффинности Kd, обычно 1-5 нМ), демонстрируя высокоаффинное распознавание рецептора, несмотря на структурные модификации. (2) Анализы связывания IGFBP: критический контроль качества, подтверждающий модификацию LR3: с использованием очищенного IGFBP-3 (основного переносчика IGF-1) или других IGFBP, измеряем связывание IGF-1 LR3 по сравнению с нативным IGF-1 с помощью поверхностного плазмонного резонанса, конкурентных анализов на основе ELISA или вестерн-лиганд-блоттинга, демонстрируя снижение аффинности в 100-1000 раз, что подтверждает успешное нарушение взаимодействий с IGFBP из-за замены Arg3 и N-концевого удлинения. (3) Аутофосфорилирование рецептора: вестерн-блоттинг, измеряющий тирозиновое фосфорилирование IGF-1R при связывании IGF-1 LR3 (pIGF-1R Tyr1135/1136), демонстрирующий активацию рецептора. (4) Анализы фосфорилирования AKT: обработка клеток IGF-1 LR3 и измерение pAKT Ser473 и Thr308 с помощью вестерн-блоттинга или проточной цитометрии с фосфо-специфичными антителами, подтверждающее активацию пути PI3K-AKT (анаболический/выживающий сигналинг). (5) Активация MAPK: измерение pERK1/2 (Thr202/Tyr204) и pMEK1/2, демонстрирующее стимуляцию пути RAS-MAPK (пролиферация). (6) Анализы пути mTOR: вестерн-блоттинг для фосфо-p70S6K (Thr389), фосфо-4E-BP1 (Thr37/46) и фосфо-рибосомального белка S6, подтверждающий активацию mTORC1, критически важную для синтеза белка. (7) Биоанализы клеточной пролиферации: MTT, включение BrdU или подсчет клеток в миобластах или фибробластах, показывающие зависимую от дозы пролиферацию со значениями EC50, демонстрирующими мощную митогенную активность. (8) Анализы синтеза белка: включение [3H]-лейцина или [35S]-метионина, или включение пуромицина (метод SUnSET), количественно определяющие трансляцию, стимулированную IGF-1 LR3. (9) Сравнительная активность: параллельное тестирование IGF-1 LR3 и нативного IGF-1, показывающее усиленные анаболические эффекты LR3 из-за устойчивой биодоступности. CoA включает данные по связыванию IGF-1R (аффинность Kd), сравнение связывания IGFBP (демонстрация снижения по сравнению с нативным IGF-1), зависимые от дозы ответы фосфорилирования AKT/MAPK и биоанализы клеточной пролиферации/синтеза белка, что гарантирует фармацевтическое качество IGF-1 LR3 с подтвержденной активацией рецептора и сниженным связыванием IGFBP.