IGF-1 LR3

L означає Long (довгий): додаткові 13 амінокислот на початку. R3 означає, що на позиції 3 аргінін замінює глутамінову кислоту. Разом вони запобігають зв'язуванню IGF білками-переносниками.

Обидва активують рецептор IGF-1. Природний IGF-1 здебільшого утримується білками-переносниками і діє короткочасно. LR3 зв'язується з цими білками значно менше, тому залишається вільним і активним набагато довше.

Гормон росту діє переважно через стимуляцію вироблення IGF-1 печінкою, а також має власні ефекти. IGF-1 LR3 пропускає цей етап і діє безпосередньо на рецептор IGF-1.

Обидва уникають білків-переносників. LR3 робить це завдяки довшому ланцюгу і діє довше. IGF-DES – це IGF-1 без перших трьох амінокислот, який діє коротший час.

Десять герметичних флаконів ліофілізованого IGF-1 LR3 з однієї партії, по 0,1 мг або 1 мг у флаконі. Один звіт про партію охоплює всі десять.

IGF-1 LR3 доставляється у вигляді ліофілізованого порошку в герметичних флаконах, який залишається стабільним за кімнатної температури під час транспортування. Кожне замовлення відправляється в звичайній упаковці з відстеженням, і більшість прибуває протягом 7–14 днів. Після отримання зберігайте в морозильнику при -20°C. Сертифікат аналізу для партії, яку ми відправляємо зараз, доступний на нашій сторінці lab-results.

Наш IGF-1 LR3 перевищує >98% чистоти, підтвердженої ВЕРХ, з комплексним контролем якості для цього модифікованого фактора росту з 83 амінокислот. Кожна партія проходить: обернено-фазову ВЕРХ, що демонструє >98% чистоти з характерним часом утримування для подовженого аналога LR3 з 83 АК; мас-спектрометричне підтвердження молекулярної маси для модифікованої структури IGF-1 (очікувана маса ~9117 Да для варіанта LR3 з 83 амінокислот проти ~7649 Да для нативного IGF-1 з 70 АК); підтвердження послідовності пептиду, що підтверджує N-кінцеве подовження на 13 амінокислот плюс заміну глутамінової кислоти на аргінін на позиції 3 за допомогою фрагментації МС/МС або деградації за Едманом; валідацію модифікації, що забезпечує правильне включення Arg3 і точність N-кінцевого подовження; біоаналізи зв'язування з рецептором IGF-1, що вимірюють спорідненість IGF-1 LR3 до IGF-1R за допомогою конкурентних аналізів рецептора або досліджень зв'язування на основі клітин (Kd зазвичай низький наномолярний, порівнянний з нативним IGF-1, незважаючи на структурні модифікації); аналізи зв'язування з IGFBP, що демонструють знижену спорідненість – порівняння зв'язування IGF-1 LR3 і нативного IGF-1 з IGFBP-3 та іншими IGFBP за допомогою поверхневого плазмонного резонансу або конкурентних аналізів, що підтверджують зниження в 100–1000 разів, підтверджуючи модифікації Arg3/подовження; біоаналізи проліферації клітин з використанням міобластів, фібробластів або інших клітин, чутливих до IGF-1, що вимірюють дозозалежну проліферацію (аналізи MTT/BrdU), демонструючи функціональну активацію IGF-1R; аналізи фосфорилювання AKT і MAPK – обробка клітин IGF-1 LR3 і вимірювання pAKT (Ser473) і pERK1/2 за допомогою вестерн-блоту, що підтверджує активацію шляхів PI3K-AKT-mTOR і RAS-MAPK; аналізи синтезу білка з використанням включення [3H]-лейцину або пуроміцину, що вимірюють стимульовану IGF-1 LR3 трансляцію, підтверджуючи анаболічну сигналізацію; тестування на ендотоксини (<0.1 EU/мг) і комплексний Сертифікат аналізу. Чистота >98% забезпечує відтворювану активацію IGF-1R, стабільні проліферативні/анаболічні відповіді та надійні дослідження росту м'язів. Контроль якості підтверджує хімічну ідентичність (послідовність з 83 АК з Arg3 і N-кінцевим подовженням), знижене зв'язування з IGFBP (ключова функціональна модифікація) та біологічну активність (сигналізація IGF-1R, проліферація клітин, синтез білка), що є важливим для досліджень аналогів IGF-1.

Окрім хімічної чистоти (HPLC >98%, мас-спектрометрія, що підтверджує структуру з 83 амінокислот із Arg3 та N-кінцевим подовженням), ми проводимо комплексні аналізи зв'язування рецепторів та IGFBP: (1) Аналізи зв'язування рецептора IGF-1: використовуючи клітини, що експресують IGF-1R (міобласти, фібробласти або клітинні лінії, трансфіковані IGF-1R), вимірюємо здатність IGF-1 LR3 конкурувати з радіоактивно міченим IGF-1 за зв'язування з рецептором (конкурентні аналізи зв'язування) або безпосередньо зв'язуватися з IGF-1R (аналізи насичення, що визначають спорідненість Kd зазвичай 1-5 нМ), демонструючи високоафінне розпізнавання рецептора, незважаючи на структурні модифікації. (2) Аналізи зв'язування IGFBP: критичний контроль якості, що підтверджує модифікацію LR3: використовуючи очищений IGFBP-3 (основний носій IGF-1) або інші IGFBP, вимірюємо зв'язування IGF-1 LR3 порівняно з нативним IGF-1 за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, конкурентних аналізів на основі ELISA або вестерн-блоту лігандів, демонструючи знижену афінність у 100-1000 разів, що підтверджує успішне порушення взаємодій з IGFBP завдяки заміні Arg3 та N-кінцевому подовженню. (3) Аутопошування рецептора: вестерн-блот, що вимірює тирозинфосфорилювання IGF-1R після зв'язування IGF-1 LR3 (pIGF-1R Tyr1135/1136), демонструючи активацію рецептора. (4) Аналізи фосфорилювання AKT: обробка клітин IGF-1 LR3 та вимірювання pAKT Ser473 і Thr308 за допомогою вестерн-блоту або проточної цитометрії з фосфореспецифічними антитілами, підтверджуючи активацію шляху PI3K-AKT (анаболічний/виживальний сигналінг). (5) Активація MAPK: вимірювання pERK1/2 (Thr202/Tyr204) та pMEK1/2, що демонструє стимуляцію шляху RAS-MAPK (проліферація). (6) Аналізи шляху mTOR: вестерн-блот для фосфо-p70S6K (Thr389), фосфо-4E-BP1 (Thr37/46) та фосфо-рибосомального білка S6, що підтверджує активацію mTORC1, критичну для синтезу білка. (7) Біоаналізи клітинної проліферації: MTT, включення BrdU або підрахунок клітин у міобластах або фібробластах, що показують дозозалежну проліферацію зі значеннями EC50, що демонструють потужну мітогенну активність. (8) Аналізи синтезу білка: включення [3H]-лейцину або [35S]-метіоніну, або включення пуроміцину (метод SUnSET), що кількісно визначають трансляцію, стимульовану IGF-1 LR3. (9) Порівняльна потужність: паралельне тестування IGF-1 LR3 та нативного IGF-1, що показує посилені анаболічні ефекти LR3 завдяки стійкій біодоступності. CoA включає дані зв'язування IGF-1R (спорідненість Kd), порівняння зв'язування IGFBP (демонстрація зниження порівняно з нативним IGF-1), дозозалежні відповіді фосфорилювання AKT/MAPK та біоаналізи клітинної проліферації/синтезу білка, що гарантує фармацевтичну якість IGF-1 LR3 з підтвердженою активацією рецептора та зниженим зв'язуванням IGFBP.