IGF-1 LR3

L là viết tắt của Long (dài): thêm 13 axit amin ở đầu. R3 có nghĩa là arginine nằm ở vị trí số 3 thay cho axit glutamic. Cùng nhau, chúng ngăn các protein liên kết IGF bẫy nó.

Cả hai đều kích hoạt thụ thể IGF-1. IGF-1 tự nhiên chủ yếu bị giữ bởi các protein liên kết và hoạt động trong thời gian ngắn. LR3 liên kết các protein đó ít hơn nhiều, do đó nó tồn tại tự do và hoạt động lâu hơn đáng kể.

Hormone tăng trưởng hoạt động chủ yếu bằng cách khiến gan sản xuất IGF-1, cộng với các tác động riêng của nó. IGF-1 LR3 bỏ qua bước đó và tác động trực tiếp lên thụ thể IGF-1.

Cả hai đều thoát khỏi các protein liên kết. LR3 thực hiện điều này bằng một chuỗi dài hơn và kéo dài lâu hơn. IGF-DES là IGF-1 bị thiếu ba axit amin đầu tiên và hoạt động trong thời gian ngắn hơn.

Mười lọ kín chứa IGF-1 LR3 đông khô, tất cả từ một lô, với hàm lượng 0,1 mg hoặc 1 mg mỗi lọ. Một báo cáo lô duy nhất bao gồm tất cả mười lọ.

IGF-1 LR3 được vận chuyển dưới dạng bột đông khô trong các lọ kín, giữ ổn định ở nhiệt độ phòng trong suốt hành trình. Mọi đơn hàng đều được gửi trong bao bì trơn có mã theo dõi và hầu hết đến nơi trong vòng 7 đến 14 ngày. Bảo quản trong tủ đông ở -20°C khi nhận được. Giấy chứng nhận phân tích (COA) cho lô chúng tôi đang giao hiện có trên trang kết quả phòng thí nghiệm của chúng tôi.

IGF-1 LR3 của chúng tôi vượt quá độ tinh khiết >98% được xác nhận bằng HPLC với kiểm soát chất lượng toàn diện cho yếu tố tăng trưởng biến đổi gồm 83 axit amin này. Mỗi lô trải qua: HPLC pha đảo chứng minh độ tinh khiết >98% với thời gian lưu đặc trưng của chất tương tự LR3 mở rộng 83-AA, xác nhận trọng lượng phân tử bằng khối phổ cho cấu trúc IGF-1 biến đổi (khối lượng dự kiến ~9117 Da cho biến thể LR3 83 axit amin so với ~7649 Da cho IGF-1 tự nhiên 70-AA), xác nhận trình tự peptide xác nhận phần mở rộng 13 axit amin ở đầu N cộng với sự thay thế axit glutamic → arginine ở vị trí số 3 thông qua phân mảnh MS/MS hoặc phân giải Edman, xác nhận biến thể đảm bảo sự kết hợp Arg3 chính xác và độ chính xác của phần mở rộng đầu N, xét nghiệm sinh học liên kết thụ thể IGF-1 đo ái lực của IGF-1 LR3 đối với IGF-1R bằng xét nghiệm cạnh tranh thụ thể hoặc nghiên cứu liên kết dựa trên tế bào (Kd thường ở mức nanomol thấp, tương đương với IGF-1 tự nhiên mặc dù có các biến đổi cấu trúc), xét nghiệm liên kết IGFBP chứng minh ái lực giảm - so sánh liên kết IGF-1 LR3 so với IGF-1 tự nhiên với IGFBP-3 và các IGFBP khác thông qua cộng hưởng plasmon bề mặt hoặc xét nghiệm cạnh tranh xác nhận mức giảm 100-1000 lần xác nhận các biến đổi Arg3/phần mở rộng, xét nghiệm sinh học tăng sinh tế bào sử dụng nguyên bào cơ, nguyên bào sợi hoặc các tế bào đáp ứng IGF-1 khác đo sự tăng sinh phụ thuộc liều (xét nghiệm MTT/BrdU) chứng minh kích hoạt IGF-1R chức năng, xét nghiệm phosphoryl hóa AKT và MAPK - xử lý tế bào với IGF-1 LR3 và đo pAKT (Ser473) và pERK1/2 thông qua Western blot xác nhận kích hoạt con đường PI3K-AKT-mTOR và RAS-MAPK, xét nghiệm tổng hợp protein sử dụng kết hợp [3H]-leucine hoặc puromycin đo quá trình dịch mã được kích thích bởi IGF-1 LR3 xác nhận tín hiệu đồng hóa, xét nghiệm nội độc tố (<0,1 EU/mg) và Giấy chứng nhận phân tích toàn diện. Độ tinh khiết >98% đảm bảo kích hoạt IGF-1R có thể tái lập, các phản ứng tăng sinh/đồng hóa nhất quán và nghiên cứu tăng trưởng cơ bắp đáng tin cậy. Kiểm soát chất lượng xác nhận danh tính hóa học (trình tự 83-AA với Arg3 và phần mở rộng đầu N), giảm liên kết IGFBP (biến đổi chức năng chính) và hoạt tính sinh học (tín hiệu IGF-1R, tăng sinh tế bào, tổng hợp protein) cần thiết cho nghiên cứu chất tương tự IGF-1.

Ngoài độ tinh khiết hóa học (HPLC >98%, khối phổ xác nhận cấu trúc 83 axit amin với Arg3 và phần kéo dài đầu N), chúng tôi thực hiện các xét nghiệm liên kết thụ thể và IGFBP toàn diện: (1) Xét nghiệm liên kết thụ thể IGF-1 - sử dụng tế bào biểu hiện IGF-1R (nguyên bào cơ, nguyên bào sợi hoặc dòng tế bào chuyển nhiễm IGF-1R), đo khả năng cạnh tranh của IGF-1 LR3 với IGF-1 đánh dấu phóng xạ để liên kết thụ thể (xét nghiệm liên kết cạnh tranh) hoặc liên kết trực tiếp với IGF-1R (liên kết bão hòa xác định ái lực Kd thường 1-5 nM), chứng minh sự nhận diện thụ thể ái lực cao bất chấp các biến đổi cấu trúc. (2) Xét nghiệm liên kết IGFBP - kiểm soát chất lượng quan trọng xác nhận biến đổi LR3: sử dụng IGFBP-3 tinh khiết (chất mang IGF-1 chính) hoặc các IGFBP khác, đo liên kết của IGF-1 LR3 so với IGF-1 tự nhiên qua cộng hưởng plasmon bề mặt, xét nghiệm cạnh tranh dựa trên ELISA hoặc Western ligand blot, chứng minh ái lực giảm 100-1000 lần xác nhận sự thay thế Arg3 và phần kéo dài đầu N đã phá vỡ thành công tương tác IGFBP. (3) Tự phosphoryl hóa thụ thể - Western blot đo phosphoryl hóa tyrosine IGF-1R khi IGF-1 LR3 liên kết (pIGF-1R Tyr1135/1136), chứng minh sự kích hoạt thụ thể. (4) Xét nghiệm phosphoryl hóa AKT - xử lý tế bào với IGF-1 LR3 và đo pAKT Ser473 và Thr308 qua Western blot hoặc đo tế bào dòng chảy phospho, xác nhận sự kích hoạt con đường PI3K-AKT (tín hiệu đồng hóa/sống sót). (5) Kích hoạt MAPK - đo pERK1/2 (Thr202/Tyr204) và pMEK1/2 chứng minh sự kích thích con đường RAS-MAPK (tăng sinh). (6) Xét nghiệm con đường mTOR - Western blot cho phospho-p70S6K (Thr389), phospho-4E-BP1 (Thr37/46) và phospho-S6 ribosomal protein xác nhận sự kích hoạt mTORC1 quan trọng cho tổng hợp protein. (7) Xét nghiệm tăng sinh tế bào - MTT, kết hợp BrdU hoặc đếm tế bào trong nguyên bào cơ hoặc nguyên bào sợi cho thấy sự tăng sinh phụ thuộc liều với giá trị EC50 chứng minh hoạt động nguyên phân mạnh. (8) Xét nghiệm tổng hợp protein - kết hợp [3H]-leucine hoặc [35S]-methionine, hoặc kết hợp puromycin (phương pháp SUnSET) định lượng sự dịch mã do IGF-1 LR3 kích thích. (9) So sánh hiệu lực - thử nghiệm song song IGF-1 LR3 so với IGF-1 tự nhiên cho thấy tác dụng đồng hóa tăng cường của LR3 do khả dụng sinh học bền vững. CoA bao gồm dữ liệu liên kết IGF-1R (ái lực Kd), so sánh liên kết IGFBP (chứng minh sự giảm so với IGF-1 tự nhiên), đáp ứng liều phosphoryl hóa AKT/MAPK và xét nghiệm tăng sinh tế bào/tổng hợp protein - đảm bảo IGF-1 LR3 cấp dược phẩm với sự kích hoạt thụ thể đã xác nhận và giảm liên kết IGFBP.