IGF-1 LR3

L oznacza Long (długi): dodatkowe 13 aminokwasów na początku. R3 oznacza, że w pozycji 3 znajduje się arginina zamiast kwasu glutaminowego. Razem zapobiegają wiązaniu IGF przez białka wiążące.

Oba aktywują receptor IGF-1. Naturalny IGF-1 jest głównie zatrzymywany przez białka wiążące i działa krótko. LR3 wiąże te białka znacznie słabiej, dzięki czemu pozostaje wolny i aktywny znacznie dłużej.

Hormon wzrostu działa głównie poprzez stymulację wątroby do produkcji IGF-1, a także ma własne efekty. IGF-1 LR3 pomija ten etap i działa bezpośrednio na receptor IGF-1.

Oba unikają białek wiążących. LR3 robi to za pomocą dłuższego łańcucha i działa dłużej. IGF-DES to IGF-1 pozbawiony pierwszych trzech aminokwasów i działa przez krótszy czas.

Dziesięć zapieczętowanych fiolek liofilizowanego IGF-1 LR3, wszystkie z jednej partii, po 0,1 mg lub 1 mg na fiolkę. Jeden raport partii obejmuje wszystkie dziesięć.

IGF-1 LR3 jest wysyłany jako liofilizowany proszek w zapieczętowanych fiolkach, który pozostaje stabilny w temperaturze pokojowej podczas transportu. Każde zamówienie jest wysyłane w nieoznakowanym opakowaniu z numerem przesyłki, a większość dociera w ciągu 7 do 14 dni. Po otrzymaniu przechowuj w zamrażarce w temperaturze -20°C. Świadectwo analizy dla aktualnie wysyłanej partii znajduje się na naszej stronie z wynikami laboratoryjnymi.

Nasz IGF-1 LR3 przekracza >98% czystości potwierdzonej metodą HPLC, z kompleksową kontrolą jakości dla tego zmodyfikowanego czynnika wzrostu składającego się z 83 aminokwasów. Każda partia przechodzi: chromatografię odwróconej fazy HPLC wykazującą >98% czystości z czasem retencji charakterystycznym dla wydłużonego analogu LR3 o 83 AA, potwierdzenie masy cząsteczkowej za pomocą spektrometrii mas dla zmodyfikowanej struktury IGF-1 (oczekiwana masa ~9117 Da dla wariantu LR3 o 83 aminokwasach w porównaniu do ~7649 Da dla natywnego IGF-1 o 70 AA), weryfikację sekwencji peptydowej potwierdzającą 13-aminokwasowe przedłużenie N-końcowe oraz substytucję kwasu glutaminowego na argininę w pozycji 3 za pomocą fragmentacji MS/MS lub degradacji Edmana, walidację modyfikacji zapewniającą prawidłowe wbudowanie Arg3 i dokładność przedłużenia N-końcowego, testy wiązania z receptorem IGF-1 mierzące powinowactwo IGF-1 LR3 do IGF-1R przy użyciu testów kompetycyjnych z receptorem lub badań wiązania na komórkach (Kd zazwyczaj w niskim zakresie nanomolarnym, porównywalne do natywnego IGF-1 pomimo modyfikacji strukturalnych), testy wiązania z IGFBP wykazujące zmniejszone powinowactwo - porównanie wiązania IGF-1 LR3 z natywnym IGF-1 do IGFBP-3 i innych IGFBP za pomocą rezonansu plazmonów powierzchniowych lub testów kompetycyjnych potwierdzających 100-1000-krotne zmniejszenie, co potwierdza modyfikacje Arg3/przedłużenia, testy biologiczne proliferacji komórek z użyciem mioblastów, fibroblastów lub innych komórek reagujących na IGF-1 mierzące zależną od dawki proliferację (testy MTT/BrdU) wykazujące funkcjonalną aktywację IGF-1R, testy fosforylacji AKT i MAPK - traktowanie komórek IGF-1 LR3 i pomiar pAKT (Ser473) i pERK1/2 za pomocą Western blot potwierdzające aktywację szlaków PI3K-AKT-mTOR i RAS-MAPK, testy syntezy białek z użyciem inkorporacji [3H]-leucyny lub puromycyny mierzące translację stymulowaną przez IGF-1 LR3 potwierdzające sygnalizację anaboliczną, testy endotoksyn (<0,1 EU/mg) oraz kompleksowe świadectwo analizy. Czystość >98% zapewnia powtarzalną aktywację IGF-1R, spójne odpowiedzi proliferacyjne/anaboliczne oraz wiarygodne badania wzrostu mięśni. Kontrola jakości potwierdza tożsamość chemiczną (sekwencja 83 AA z Arg3 i przedłużeniem N-końcowym), zmniejszone wiązanie IGFBP (kluczowa modyfikacja funkcjonalna) oraz aktywność biologiczną (sygnalizacja IGF-1R, proliferacja komórek, synteza białek) niezbędną do badań nad analogami IGF-1.

Poza czystością chemiczną (HPLC >98%, spektrometria mas potwierdzająca strukturę 83-AA z Arg3 i wydłużeniem N-końcowym), wykonujemy kompleksowe testy wiązania receptora i IGFBP: (1) Testy wiązania receptora IGF-1: przy użyciu komórek eksprymujących IGF-1R (mioblasty, fibroblasty lub linie komórkowe transfekowane IGF-1R), mierzymy zdolność IGF-1 LR3 do konkurowania z radioaktywnie znakowanym IGF-1 o wiązanie z receptorem (testy konkurencyjnego wiązania) lub bezpośredniego wiązania IGF-1R (nasycenie wiązania określające powinowactwo Kd, zwykle 1-5 nM), co wykazuje wysokie powinowactwo do receptora pomimo modyfikacji strukturalnych. (2) Testy wiązania IGFBP: kluczowa kontrola jakości walidująca modyfikację LR3: przy użyciu oczyszczonego IGFBP-3 (głównego nośnika IGF-1) lub innych IGFBP, mierzymy wiązanie IGF-1 LR3 w porównaniu z natywnym IGF-1 za pomocą rezonansu plazmonów powierzchniowych, testów konkurencyjnych ELISA lub Western ligand blot, wykazując 100-1000-krotnie zmniejszone powinowactwo, co potwierdza, że podstawienie Arg3 i wydłużenie N-końca skutecznie zakłóciły interakcje z IGFBP. (3) Autofosforylacja receptora: Western blot mierzący fosforylację tyrozyny IGF-1R po związaniu IGF-1 LR3 (pIGF-1R Tyr1135/1136), wykazujący aktywację receptora. (4) Testy fosforylacji AKT: traktowanie komórek IGF-1 LR3 i pomiar pAKT Ser473 i Thr308 za pomocą Western blot lub cytometrii przepływowej phospho-flow, potwierdzający aktywację szlaku PI3K-AKT (sygnalizacja anaboliczna/przetrwania). (5) Aktywacja MAPK: pomiar pERK1/2 (Thr202/Tyr204) i pMEK1/2 wykazujący stymulację szlaku RAS-MAPK (proliferacja). (6) Testy szlaku mTOR: Western blot dla fosfo-p70S6K (Thr389), fosfo-4E-BP1 (Thr37/46) i fosfo-białka rybosomalnego S6 potwierdzające aktywację mTORC1 kluczową dla syntezy białek. (7) Testy proliferacji komórek: MTT, inkorporacja BrdU lub liczenie komórek w mioblastach lub fibroblastach wykazujące zależną od dawki proliferację z wartościami EC50 potwierdzającymi silną aktywność mitogenną. (8) Testy syntezy białek: inkorporacja [3H]-leucyny lub [35S]-metioniny lub inkorporacja puromycyny (metoda SUnSET) ilościowo określająca translację stymulowaną przez IGF-1 LR3. (9) Porównawcza siła działania: testy porównawcze IGF-1 LR3 z natywnym IGF-1 wykazujące wzmocnione działanie anaboliczne LR3 ze względu na wydłużoną biodostępność. CoA zawiera dane dotyczące wiązania IGF-1R (powinowactwo Kd), porównanie wiązania IGFBP (wykazujące redukcję w porównaniu z natywnym IGF-1), zależności dawka-efekt fosforylacji AKT/MAPK oraz testy proliferacji komórek i syntezy białek, co zapewnia farmaceutyczną jakość IGF-1 LR3 z potwierdzoną aktywacją receptora i zmniejszonym wiązaniem IGFBP.