IGF-1 LR3

L, Long (Uzun) anlamına gelir: başlangıçta fazladan 13 amino asit bulunur. R3, glutamik asit yerine 3. pozisyonda bir arginin bulunduğu anlamına gelir. Birlikte, IGF bağlayıcı proteinlerin onu tutmasını engellerler.

Her ikisi de IGF-1 reseptörünü aktive eder. Doğal IGF-1 çoğunlukla bağlayıcı proteinler tarafından tutulur ve kısa süre etki eder. LR3 bu proteinlere çok daha az bağlanır, bu nedenle çok daha uzun süre serbest ve aktif kalır.

Büyüme hormonu çoğunlukla karaciğerin IGF-1 üretmesini sağlayarak ve kendi etkilerini göstererek çalışır. IGF-1 LR3 bu adımı atlar ve doğrudan IGF-1 reseptörüne etki eder.

Her ikisi de bağlayıcı proteinlerden kaçar. LR3 bunu daha uzun bir zincirle yapar ve daha uzun süre dayanır. IGF-DES, ilk üç amino asidi eksik olan IGF-1'dir ve daha kısa süre etki eder.

Tek bir partiden, flakon başına 0,1 mg veya 1 mg olmak üzere, on adet mühürlü liyofilize IGF-1 LR3 flakonu. Tek bir parti raporu on flakonun tamamını kapsar.

IGF-1 LR3, nakliye sırasında oda sıcaklığında stabil kalan, mühürlü flakonlarda liyofilize toz olarak gönderilir. Her sipariş, takip numarasıyla birlikte sade ambalajda gönderilir ve çoğu 7 ila 14 gün içinde ulaşır. Geldikten sonra -20°C'de dondurucuda saklayın. Şu anda göndermekte olduğumuz partiye ait Analiz Sertifikası, laboratuvar sonuçları sayfamızdadır.

IGF-1 LR3'ümüz, bu 83 amino asitli modifiye büyüme faktörü için kapsamlı kalite kontrol ile HPLC ile doğrulanmış >%98 saflığı aşmaktadır. Her parti şunlara tabi tutulur: uzatılmış 83-AA LR3 analogunun alıkonma süresi karakteristiği ile >%98 saflık gösteren ters faz HPLC, modifiye IGF-1 yapısı için kütle spektrometrisi moleküler ağırlık doğrulaması (83 amino asitli LR3 varyantı için beklenen kütle ~9117 Da, doğal 70-AA IGF-1 için ~7649 Da'ya karşı), MS/MS parçalanması veya Edman degradasyonu ile 13 amino asitli N-terminal uzantısı artı 3. pozisyonda glutamik asit→arginin substitüsyonunu doğrulayan peptit dizi doğrulaması, uygun Arg3 inkorporasyonu ve N-terminal uzantısı doğruluğunu sağlayan modifikasyon validasyonu, reseptör rekabet testleri veya hücre bazlı bağlanma çalışmaları kullanarak IGF-1 LR3'ün IGF-1R'ye afinitesini ölçen IGF-1 reseptör bağlanma biyoanalizleri (Kd tipik olarak düşük nanomolar, yapısal modifikasyonlara rağmen doğal IGF-1 ile karşılaştırılabilir), yüzey plazmon rezonansı veya rekabet testleri ile IGF-1 LR3'ün doğal IGF-1'e karşı IGFBP-3 ve diğer IGFBP'lere bağlanmasını karşılaştırarak azaltılmış afinite gösteren ve Arg3/uzantı modifikasyonlarını doğrulayan 100-1000 kat azalma sağlayan IGFBP bağlanma testleri, miyoblastlar, fibroblastlar veya diğer IGF-1'e duyarlı hücreler kullanarak doza bağlı proliferasyonu ölçen (MTT/BrdU testleri) ve fonksiyonel IGF-1R aktivasyonunu gösteren hücre proliferasyon biyoanalizleri, hücreleri IGF-1 LR3 ile tedavi edip Western blot ile pAKT (Ser473) ve pERK1/2 ölçerek PI3K-AKT-mTOR ve RAS-MAPK yolu aktivasyonunu doğrulayan AKT ve MAPK fosforilasyon testleri, [3H]-lösin inkorporasyonu veya puromisin inkorporasyonu kullanarak IGF-1 LR3 ile uyarılan translasyonu ölçen ve anabolik sinyallemeyi doğrulayan protein sentezi testleri, endotoksin testi (<0,1 EU/mg) ve kapsamlı Analiz Sertifikası. >%98 saflık, tekrarlanabilir IGF-1R aktivasyonu, tutarlı proliferatif/anabolik yanıtlar ve güvenilir kas büyümesi araştırması sağlar. Kalite kontrol, kimyasal kimliği (Arg3 ve N-terminal uzantısı ile 83-AA dizisi), azaltılmış IGFBP bağlanmasını (anahtar fonksiyonel modifikasyon) ve IGF-1 analog araştırması için gerekli olan biyolojik aktiviteyi (IGF-1R sinyallemesi, hücre proliferasyonu, protein sentezi) doğrular.

Kimyasal saflığın ötesinde (HPLC >98%, 83-AA yapısını Arg3 ve N-terminal uzantısı ile doğrulayan kütle spektrometrisi), kapsamlı reseptör ve IGFBP bağlanma testleri gerçekleştiriyoruz: (1) IGF-1 reseptör bağlanma testleri - IGF-1R eksprese eden hücreler (miyoblastlar, fibroblastlar veya IGF-1R transfekte hücre hatları) kullanılarak, IGF-1 LR3'ün radyoaktif işaretli IGF-1 ile reseptör bağlanması için rekabet etme yeteneği (rekabet bağlanma testleri) veya doğrudan IGF-1R'ye bağlanması (genellikle 1-5 nM Kd afinitesi belirleyen doygunluk bağlanması) ölçülür; bu, yapısal modifikasyonlara rağmen yüksek afiniteli reseptör tanımasını gösterir. (2) IGFBP bağlanma testleri - LR3 modifikasyonunu doğrulayan kritik kalite kontrolü: saflaştırılmış IGFBP-3 (birincil IGF-1 taşıyıcısı) veya diğer IGFBP'ler kullanılarak, yüzey plazmon rezonansı, ELISA tabanlı rekabet testleri veya Western ligand blot ile IGF-1 LR3 ile doğal IGF-1 bağlanması ölçülür; Arg3 ikamesinin ve N-terminal uzantısının IGFBP etkileşimlerini başarıyla bozduğunu gösteren 100-1000 kat azalmış afinite ortaya konur. (3) Reseptör otofosforilasyonu - IGF-1 LR3 bağlanması üzerine IGF-1R tirozin fosforilasyonunu (pIGF-1R Tyr1135/1136) ölçen Western blot, reseptör aktivasyonunu gösterir. (4) AKT fosforilasyon testleri - hücrelerin IGF-1 LR3 ile muamele edilmesi ve pAKT Ser473 ile Thr308'in Western blot veya fosfo-akış sitometrisi ile ölçülmesi, PI3K-AKT yolak aktivasyonunu (anabolik/sağkalım sinyali) doğrular. (5) MAPK aktivasyonu - pERK1/2 (Thr202/Tyr204) ve pMEK1/2 ölçümü, RAS-MAPK yolak stimülasyonunu (proliferasyon) gösterir. (6) mTOR yolak testleri - fosfo-p70S6K (Thr389), fosfo-4E-BP1 (Thr37/46) ve fosfo-S6 ribozomal protein için Western blot, protein sentezi için kritik olan mTORC1 aktivasyonunu doğrular. (7) Hücre proliferasyon biyotahlilleri - miyoblastlarda veya fibroblastlarda MTT, BrdU inkorporasyonu veya hücre sayımı, EC50 değerleriyle doza bağlı proliferasyonu gösterir ve güçlü mitojenik aktiviteyi ortaya koyar. (8) Protein sentezi testleri - [3H]-lösin veya [35S]-metiyonin inkorporasyonu veya puromisin inkorporasyonu (SUnSET yöntemi), IGF-1 LR3 ile uyarılan translasyonu niceliksel olarak ölçer. (9) Karşılaştırmalı etki - IGF-1 LR3 ile doğal IGF-1'in yan yana test edilmesi, sürekli biyoyararlanım nedeniyle LR3'ün artırılmış anabolik etkilerini gösterir. CoA, IGF-1R bağlanma verilerini (Kd afinitesi), IGFBP bağlanma karşılaştırmasını (doğal IGF-1'e kıyasla azalmayı gösteren), AKT/MAPK fosforilasyon doz-yanıtlarını ve hücre proliferasyonu/protein sentezi biyotahlillerini içerir; bu da doğrulanmış reseptör aktivasyonu ve azaltılmış IGFBP bağlanması ile farmasötik sınıfı IGF-1 LR3'ü garanti eder.