Kisspeptin-10

KISS1R, inicialmente chamado de GPR54. Ele está localizado nos neurônios de GnRH no cérebro. Pessoas sem uma cópia funcional nunca iniciam a puberdade.

Ambas vêm do mesmo precursor. A kisspeptina-54 é a forma longa; a kisspeptina-10 são seus últimos dez aminoácidos, a parte que se liga ao receptor. A forma longa dura mais tempo no sangue.

A kisspeptina atua um nível acima, nos neurônios que liberam GnRH. A gonadorelina é o próprio GnRH, atuando na hipófise.

Sua amida C-terminal (o -NH2 na fenilalanina final) faz parte do hormônio natural e é necessária para a atividade total no receptor. Seu certificado mostra a amida.

Dez frascos lacrados de kisspeptina-10 liofilizada, todos do mesmo lote, com 5 mg ou 10 mg por frasco. Um relatório de lote cobre todos os dez.

A kisspeptina-10 é enviada como pó liofilizado em frascos lacrados, que permanece estável em temperatura ambiente durante o transporte. Cada pedido sai em embalagem discreta com rastreamento, e a maioria chega em 7 a 14 dias. Armazene no congelador a -20°C assim que chegar. O Certificado de Análise do lote que estamos enviando atualmente está em nossa página de resultados laboratoriais.

Nosso Kisspeptin-10 excede >98% de pureza verificada por HPLC de fase reversa demonstrando tempo de retenção característico da sequência de decapeptídeo (tipicamente Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 para KP-10 humano). Cada lote passa por controle de qualidade abrangente: confirmação por espectrometria de massa do peso molecular (~1302 Da) validando a sequência completa de dez aminoácidos incluindo a amidação C-terminal (crítica para bioatividade - kisspeptina não amidada mostra ativação de GPR54 marcadamente reduzida), sequenciamento de peptídeos por degradação de Edman ou fragmentação MS/MS verificando cada resíduo e confirmando o motivo conservado C-terminal Arg-Phe-NH2 essencial para ligação ao receptor, bioensaios de ligação ao receptor GPR54 usando células que expressam GPR54 (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) medindo o deslocamento competitivo da kisspeptina radiomarcada ou IC50/EC50 de mobilização de cálcio (tipicamente 1-10 nM demonstrando reconhecimento de receptor de alta afinidade), bioensaios funcionais de secreção de LH tratando culturas primárias de gonadotrofos hipofisários ou tecido hipofisário intacto com Kisspeptin-10 medindo a liberação de LH via ELISA/RIA quantificando EC50 de dose-resposta (faixa nanomolar), ensaios de mobilização de cálcio usando indicadores fluorescentes de Ca²⁺ (Fluo-4, Fura-2) em células que expressam GPR54 demonstrando que Kisspeptin-10 eleva de forma dose-dependente o Ca²⁺ intracelular validando a ativação da via Gq-PLC-IP3, ensaios de dessensibilização do receptor mostrando que a exposição contínua ao Kisspeptin-10 reduz a resposta versus administração pulsátil (validando o requisito fisiológico de pulso), teste de endotoxina (<0,1 EU/mg) e Certificado de Análise abrangente.

Além da pureza química (HPLC >98%, espectrometria de massas confirmando a sequência do decapeptídeo e a amidação C-terminal), empregamos validação abrangente do receptor GPR54 e validação funcional: (1) Verificação da amidação C-terminal - espectrometria de massas medindo com precisão o peso molecular (~1302 Da para amidado vs ~1303 Da para ácido livre) confirmando a presença de -NH2 essencial para a bioatividade. (2) Ensaios de ligação ao GPR54 - usando células que expressam estavelmente GPR54 humano (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) medindo o deslocamento competitivo da kisspeptina radiomarcada ([125I]-kisspeptin) ou ligante fluorescente pelo Kisspeptin-10, determinando IC50 (tipicamente 1-10 nM) e confirmando o reconhecimento do receptor de alta afinidade. (3) Ensaios de mobilização de cálcio - tratando células que expressam GPR54 com Kisspeptin-10 em doses crescentes e medindo a elevação intracelular de Ca²⁺ em tempo real via fluorescência de Fluo-4 ou Fura-2, quantificando EC50 (faixa nanomolar) e demonstrando a ativação da via Gq-proteína-PLC-IP3-Ca²⁺ que se acopla à secreção de GnRH. (4) Bioensaios de secreção de LH - validação funcional crítica: tratando culturas primárias de gonadotrofos hipofisários ou explantes de tecido hipofisário com Kisspeptin-10 e medindo a liberação de LH no meio via ELISA ou RIA, demonstrando secreção de LH dependente da dose com quantificação de EC50, validando a tradução da ativação do GPR54 para a saída hormonal. (5) Fosforilação de ERK1/2 - Western blot mostrando que o Kisspeptin-10 ativa a via MAPK em células que expressam GPR54. (6) Cinética de dessensibilização do receptor - demonstrando que a exposição contínua ao Kisspeptin-10 reduz as respostas de cálcio em comparação com a administração pulsátil, validando o requisito fisiológico de estimulação pulsátil. (7) Controles de seletividade - mostrando que o Kisspeptin-10 ativa células que expressam GPR54, mas não células parentais sem o receptor, confirmando efeitos mediados pelo receptor. (8) Comparação não amidada - se disponível, demonstrando que o Kisspeptin-10-NH2 amidado mostra potência 100-1000 vezes maior que o Kisspeptin-10-OH, validando a importância da amidação.