Kisspeptin-10

KISS1R, inicialmente denominado GPR54. Se encuentra en las neuronas GnRH del cerebro. Las personas sin una copia funcional nunca inician la pubertad.

Ambas provienen del mismo precursor. Kisspeptin-54 es la forma larga; kisspeptin-10 son sus últimos diez aminoácidos, la parte que se une al receptor. La forma larga dura más tiempo en la sangre.

La kisspeptina actúa un paso más arriba, sobre las neuronas que liberan GnRH. La gonadorelina es la propia GnRH, que actúa sobre la hipófisis.

Su amida C-terminal (el -NH2 en la fenilalanina final) forma parte de la hormona natural y es necesaria para la actividad completa en el receptor. Su certificado muestra la amida.

Diez viales sellados de kisspeptin-10 liofilizada, todos del mismo lote, a 5 mg o 10 mg por vial. Un informe de lote cubre los diez.

Kisspeptin-10 se envía como polvo liofilizado en viales sellados, que se mantiene estable a temperatura ambiente durante el trayecto. Cada pedido sale en embalaje discreto con seguimiento, y la mayoría llega en un plazo de 7 a 14 días. Una vez recibido, consérvelo en el congelador a -20°C. El Certificado de Análisis del lote que estamos enviando actualmente está en nuestra página de resultados de laboratorio.

Nuestro Kisspeptin-10 supera >98% de pureza verificada mediante HPLC en fase reversa que demuestra un tiempo de retención característico de la secuencia decapeptídica (típicamente Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 para KP-10 humana). Cada lote se somete a un control de calidad integral: confirmación del peso molecular por espectrometría de masas (~1302 Da) que valida la secuencia completa de diez aminoácidos, incluida la amidación C-terminal (crítica para la bioactividad; la kisspeptina no amidada muestra una activación de GPR54 marcadamente reducida), secuenciación peptídica mediante degradación de Edman o fragmentación MS/MS que verifica cada residuo y confirma el motivo conservado C-terminal Arg-Phe-NH2 esencial para la unión al receptor, bioensayos de unión al receptor GPR54 utilizando células que expresan GPR54 (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) que miden el desplazamiento competitivo de kisspeptina radiomarcada por Kisspeptin-10 o la IC50/EC50 de movilización de calcio (típicamente 1-10 nM, lo que demuestra un reconocimiento del receptor de alta afinidad), bioensayos funcionales de secreción de LH que tratan cultivos primarios de gonadotropos hipofisarios o tejido hipofisario intacto con Kisspeptin-10 midiendo la liberación de LH mediante ELISA/RIA que cuantifica la EC50 de la relación dosis-respuesta (rango nanomolar), ensayos de movilización de calcio utilizando indicadores fluorescentes de Ca²⁺ (Fluo-4, Fura-2) en células que expresan GPR54 que demuestran que Kisspeptin-10 eleva el Ca²⁺ intracelular de forma dependiente de la dosis, validando la activación de la vía Gq-PLC-IP3, ensayos de desensibilización del receptor que muestran que la exposición continua a Kisspeptin-10 reduce la respuesta en comparación con la administración pulsátil (validando el requisito fisiológico de pulso), pruebas de endotoxinas (<0.1 EU/mg) y un Certificado de Análisis completo.

Más allá de la pureza química (HPLC >98%, espectrometría de masas que confirma la secuencia del decapéptido y la amidación C-terminal), empleamos una validación integral del receptor GPR54 y funcional: (1) Verificación de la amidación C-terminal: espectrometría de masas que mide con precisión el peso molecular (~1302 Da para amidado vs ~1303 Da para ácido libre) confirmando la presencia de -NH2 esencial para la bioactividad. (2) Ensayos de unión a GPR54: uso de células que expresan establemente GPR54 humano (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) midiendo el desplazamiento competitivo de kisspeptina radiomarcada ([125I]-kisspeptina) o ligando fluorescente determinando IC50 (típicamente 1-10 nM) confirmando el reconocimiento de alta afinidad por el receptor. (3) Ensayos de movilización de calcio: tratamiento de células que expresan GPR54 con Kisspeptin-10 en dosis crecientes midiendo la elevación de Ca²⁺ intracelular en tiempo real mediante fluorescencia de Fluo-4 o Fura-2 cuantificando EC50 (rango nanomolar) demostrando la activación de la vía Gq-proteína-PLC-IP3-Ca²⁺ que se acopla a la secreción de GnRH. (4) Bioensayos de secreción de LH: validación funcional crítica: tratamiento de cultivos primarios de gonadotropos hipofisarios o explantes de tejido hipofisario con Kisspeptin-10 midiendo la liberación de LH en el medio mediante ELISA o RIA demostrando secreción de LH dependiente de dosis con cuantificación de EC50 validando la traducción de la activación de GPR54 a la salida hormonal. (5) Fosforilación de ERK1/2: Western blot que muestra que Kisspeptin-10 activa la vía MAPK en células que expresan GPR54. (6) Cinética de desensibilización del receptor: demostrando que la exposición continua a Kisspeptin-10 reduce las respuestas de calcio en comparación con la administración pulsátil, validando el requisito fisiológico de estimulación pulsátil. (7) Controles de selectividad: mostrando que Kisspeptin-10 activa células que expresan GPR54 pero no células parentales que carecen del receptor, confirmando efectos mediados por el receptor. (8) Comparación no amidada: si está disponible, demostrando que Kisspeptin-10-NH2 amidado muestra una potencia 100-1000 veces mayor que Kisspeptin-10-OH validando la importancia de la amidación.