Kisspeptin-10

KISS1R, ursprünglich GPR54 genannt. Er sitzt auf den GnRH-Neuronen des Gehirns. Menschen ohne eine funktionierende Kopie beginnen nie mit der Pubertät.

Beide stammen vom gleichen Vorläufer ab. Kisspeptin-54 ist die lange Form; Kisspeptin-10 sind seine letzten zehn Aminosäuren, der Teil, der an den Rezeptor bindet. Die lange Form bleibt länger im Blut.

Kisspeptin wirkt eine Stufe höher, auf die Neuronen, die GnRH freisetzen. Gonadorelin ist GnRH selbst und wirkt auf die Hypophyse.

Sein C-terminales Amid (das -NH2 am endständigen Phenylalanin) ist Teil des natürlichen Hormons und wird für die volle Aktivität am Rezeptor benötigt. Sein Zertifikat weist das Amid aus.

Zehn versiegelte Fläschchen mit gefriergetrocknetem Kisspeptin-10, alle aus einer Charge, mit 5 mg oder 10 mg pro Fläschchen. Ein Chargenbericht deckt alle zehn ab.

Kisspeptin-10 wird als gefriergetrocknetes Pulver in versiegelten Fläschchen versendet, das während des Transports bei Raumtemperatur stabil bleibt. Jede Bestellung wird in neutraler Verpackung mit Sendungsverfolgung versandt, und die meisten kommen innerhalb von 7 bis 14 Tagen an. Lagern Sie es nach Erhalt im Gefrierschrank bei -20°C. Das Analysezertifikat für die Charge, die wir gerade versenden, finden Sie auf unserer Seite mit den Laborergebnissen.

Unser Kisspeptin-10 übertrifft >98% Reinheit, verifiziert durch Reverse-Phase-HPLC, die eine Retentionszeit zeigt, die für die Decapeptid-Sequenz charakteristisch ist (typischerweise Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 für humanes KP-10). Jede Charge durchläuft eine umfassende Qualitätskontrolle: Massenspektrometrie-Bestätigung des Molekulargewichts (~1302 Da), die die vollständige Zehn-Aminosäuren-Sequenz einschließlich der C-terminalen Amidierung validiert (entscheidend für die Bioaktivität – nicht-amidiertes Kisspeptin zeigt eine deutlich reduzierte GPR54-Aktivierung); Peptidsequenzierung mittels Edman-Abbau oder MS/MS-Fragmentierung, die jeden Rest verifiziert und das konservierte C-terminale Arg-Phe-NH2-Motiv bestätigt, das für die Rezeptorbindung essentiell ist; GPR54-Rezeptorbindungs-Bioassays unter Verwendung von GPR54-exprimierenden Zellen (CHO-GPR54, HEK293-GPR54), die die kompetitive Verdrängung von radioaktiv markiertem Kisspeptin oder die Calcium-Mobilisierungs-IC50/EC50 messen (typischerweise 1-10 nM, was eine hochaffine Rezeptorerkennung demonstriert); funktionelle LH-Sekretions-Bioassays, bei denen primäre Hypophysen-Gonadotrophen-Kulturen oder intaktes Hypophysengewebe mit Kisspeptin-10 behandelt und die LH-Freisetzung mittels ELISA/RIA gemessen wird, wobei die Dosis-Wirkungs-EC50 quantifiziert wird (nanomolarer Bereich); Calcium-Mobilisierungs-Assays unter Verwendung von fluoreszierenden Ca²⁺-Indikatoren (Fluo-4, Fura-2) in GPR54-exprimierenden Zellen, die zeigen, dass Kisspeptin-10 dosisabhängig das intrazelluläre Ca²⁺ erhöht, was die Aktivierung des Gq-PLC-IP3-Signalwegs validiert; Rezeptor-Desensibilisierungs-Assays, die zeigen, dass eine kontinuierliche Kisspeptin-10-Exposition die Reaktion im Vergleich zur pulsierenden Verabreichung reduziert (Validierung der physiologischen Pulsanforderung); Endotoxin-Tests (<0,1 EU/mg); und ein umfassendes Analysezertifikat.

Über die chemische Reinheit hinaus (HPLC >98 %, Massenspektrometrie zur Bestätigung der Dekapeptidsequenz und der C-terminalen Amidierung) verwenden wir eine umfassende GPR54-Rezeptor- und Funktionsvalidierung: (1) Verifizierung der C-terminalen Amidierung: Massenspektrometrie zur präzisen Messung des Molekulargewichts (~1302 Da für amidiert vs. ~1303 Da für freie Säure), die das Vorhandensein von -NH2 bestätigt, das für die Bioaktivität unerlässlich ist. (2) GPR54-Bindungsassays: Verwendung von Zellen, die humanes GPR54 stabil exprimieren (CHO-GPR54, HEK293-GPR54), Messung der kompetitiven Verdrängung von radioaktiv markiertem Kisspeptin ([125I]-Kisspeptin) oder fluoreszierendem Liganden durch Kisspeptin-10, Bestimmung des IC50 (typischerweise 1-10 nM), was die hochaffine Rezeptorerkennung bestätigt. (3) Kalziummobilisierungsassays: Behandlung von GPR54-exprimierenden Zellen mit aufsteigenden Kisspeptin-10-Dosen, Messung des intrazellulären Ca²⁺-Anstiegs in Echtzeit mittels Fluo-4- oder Fura-2-Fluoreszenz, Quantifizierung des EC50 (nanomolarer Bereich), was die Aktivierung des Gq-Protein-vermittelten PLC-IP3-Ca²⁺-Signalwegs demonstriert, der mit der GnRH-Sekretion gekoppelt ist. (4) LH-Sekretions-Bioassays: Kritische Funktionsvalidierung: Behandlung primärer gonadotroper Zellkulturen oder Hypophysengewebsexplantate mit Kisspeptin-10, Messung der LH-Freisetzung in das Medium mittels ELISA oder RIA, was eine dosisabhängige LH-Sekretion mit EC50-Quantifizierung zeigt und die Übersetzung der GPR54-Aktivierung in die hormonelle Ausgabe validiert. (5) ERK1/2-Phosphorylierung: Western Blot zeigt, dass Kisspeptin-10 den MAPK-Signalweg in GPR54-exprimierenden Zellen aktiviert. (6) Kinetik der Rezeptor-Desensitivität: Demonstration, dass kontinuierliche Kisspeptin-10-Exposition die Kalziumantworten im Vergleich zur pulsierenden Verabreichung reduziert, was die physiologische Notwendigkeit einer pulsierenden Stimulation validiert. (7) Selektivitätskontrollen: Zeigen, dass Kisspeptin-10 GPR54-exprimierende Zellen, nicht aber parentale Zellen ohne Rezeptor aktiviert, was die Rezeptorvermittelten Effekte bestätigt. (8) Vergleich mit nicht-amidiertem: Wenn verfügbar, Demonstration, dass amidiertes Kisspeptin-10-NH2 eine 100- bis 1000-fach höhere Wirksamkeit als Kisspeptin-10-OH aufweist, was die Bedeutung der Amidierung validiert.