Kisspeptin-10

KISS1R, yang pertama kali disebut GPR54. Reseptor ini berada di neuron GnRH di otak. Orang tanpa salinan yang berfungsi tidak akan pernah memulai pubertas.

Keduanya berasal dari prekursor yang sama. Kisspeptin-54 adalah bentuk panjang; kisspeptin-10 adalah sepuluh asam amino terakhirnya, bagian yang mengikat reseptor. Bentuk panjang bertahan lebih lama di dalam darah.

Kisspeptin bekerja satu tingkat lebih tinggi, pada neuron yang melepaskan GnRH. Gonadorelin adalah GnRH itu sendiri, yang bekerja pada kelenjar pituitari.

Amida terminal-C-nya (gugus -NH2 pada fenilalanin terakhir) adalah bagian dari hormon alami dan diperlukan untuk aktivitas penuh pada reseptor. Sertifikatnya menunjukkan adanya amida tersebut.

Sepuluh vial tertutup rapat berisi kisspeptin-10 beku-kering, semuanya dari satu bets, dengan dosis 5 mg atau 10 mg per vial. Satu laporan bets mencakup kesepuluh vial tersebut.

Kisspeptin-10 dikirim sebagai bubuk beku-kering dalam vial tertutup rapat, yang tetap stabil pada suhu ruangan selama perjalanan. Setiap pesanan dikirim dalam kemasan polos dengan nomor pelacakan, dan sebagian besar tiba dalam 7 hingga 14 hari. Simpan di dalam freezer pada suhu -20°C setelah tiba. Sertifikat Analisis untuk bets yang kami kirimkan saat ini tersedia di halaman hasil laboratorium kami.

Kisspeptin-10 kami melampaui kemurnian >98% yang diverifikasi oleh HPLC fase terbalik yang menunjukkan waktu retensi karakteristik dari sekuens dekapeptida (biasanya Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 untuk KP-10 manusia). Setiap bets menjalani kontrol kualitas yang komprehensif: konfirmasi spektrometri massa berat molekul (~1302 Da) yang memvalidasi sekuens sepuluh asam amino lengkap termasuk amidasi terminal-C (kritis untuk bioaktivitas - kisspeptin non-amidasi menunjukkan aktivasi GPR54 yang berkurang secara signifikan), sekuensing peptida melalui degradasi Edman atau fragmentasi MS/MS yang memverifikasi setiap residu dan mengonfirmasi motif konservasi Arg-Phe-NH2 terminal-C yang penting untuk pengikatan reseptor, uji bioaktivitas pengikatan reseptor GPR54 menggunakan sel yang mengekspresikan GPR54 (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) yang mengukur perpindahan kompetitif Kisspeptin-10 dari kisspeptin berlabel radio atau mobilisasi kalsium IC50/EC50 (biasanya 1-10 nM yang menunjukkan pengenalan reseptor afinitas tinggi), uji bioaktivitas sekresi LH fungsional yang merawat kultur gonadotrof pituitari primer atau jaringan pituitari utuh dengan Kisspeptin-10 yang mengukur pelepasan LH melalui ELISA/RIA yang mengkuantifikasi EC50 respons dosis (rentang nanomolar), uji mobilisasi kalsium menggunakan indikator Ca²⁺ fluoresen (Fluo-4, Fura-2) dalam sel yang mengekspresikan GPR54 yang menunjukkan Kisspeptin-10 meningkatkan Ca²⁺ intraseluler secara tergantung dosis yang memvalidasi aktivasi jalur Gq-PLC-IP3, uji desensitisasi reseptor yang menunjukkan paparan Kisspeptin-10 terus menerus mengurangi respons dibandingkan pemberian pulsatif (memvalidasi kebutuhan denyut fisiologis), uji endotoksin (<0.1 EU/mg), dan Sertifikat Analisis yang komprehensif.

Selain kemurnian kimia (HPLC >98%, spektrometri massa yang mengonfirmasi urutan dekapeptida dan amidasi C-terminal), kami menggunakan validasi fungsional dan reseptor GPR54 yang komprehensif: (1) Verifikasi amidasi C-terminal - spektrometri massa yang mengukur berat molekul secara tepat (~1302 Da untuk teramidasi vs ~1303 Da untuk asam bebas) mengonfirmasi keberadaan -NH2 yang penting untuk bioaktivitas. (2) Uji pengikatan GPR54 - menggunakan sel yang secara stabil mengekspresikan GPR54 manusia (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) yang mengukur perpindahan kompetitif Kisspeptin-10 dari kisspeptin berlabel radio ([125I]-kisspeptin) atau ligan fluoresen yang menentukan IC50 (biasanya 1-10 nM) yang mengonfirmasi pengenalan reseptor afinitas tinggi. (3) Uji mobilisasi kalsium - merawat sel yang mengekspresikan GPR54 dengan Kisspeptin-10 dosis meningkat yang mengukur peningkatan Ca²⁺ intraseluler waktu nyata melalui fluoresensi Fluo-4 atau Fura-2 yang mengukur EC50 (kisaran nanomolar) yang menunjukkan aktivasi jalur Gq-protein-mediated PLC-IP3-Ca²⁺ yang menghubungkan ke sekresi GnRH. (4) Bioassay sekresi LH - validasi fungsional kritis: merawat kultur gonadotrof hipofisis primer atau eksplan jaringan hipofisis dengan Kisspeptin-10 yang mengukur pelepasan LH ke medium melalui ELISA atau RIA yang menunjukkan sekresi LH yang bergantung pada dosis dengan kuantifikasi EC50 yang memvalidasi penerjemahan aktivasi GPR54 ke output hormonal. (5) Fosforilasi ERK1/2 - Western blot yang menunjukkan Kisspeptin-10 mengaktifkan jalur MAPK dalam sel yang mengekspresikan GPR54. (6) Kinetika desensitisasi reseptor - menunjukkan paparan Kisspeptin-10 yang berkelanjutan mengurangi respons kalsium vs pemberian pulsatif yang memvalidasi kebutuhan fisiologis untuk stimulasi pulsatif. (7) Kontrol selektivitas - menunjukkan Kisspeptin-10 mengaktifkan sel yang mengekspresikan GPR54 tetapi tidak sel induk yang kekurangan reseptor yang mengonfirmasi efek yang dimediasi reseptor. (8) Perbandingan non-amidasi - jika tersedia, menunjukkan Kisspeptin-10-NH2 teramidasi menunjukkan potensi 100-1000 kali lebih besar daripada Kisspeptin-10-OH yang memvalidasi pentingnya amidasi.