Kisspeptin-10

KISS1R, oorspronkelijk GPR54 genoemd. Deze bevindt zich op de GnRH-neuronen in de hersenen. Personen zonder een werkende kopie beginnen nooit met de puberteit.

Beide komen uit dezelfde precursor. Kisspeptine-54 is de lange vorm; kisspeptine-10 zijn de laatste tien aminozuren, het deel dat aan de receptor bindt. De lange vorm blijft langer in het bloed.

Kisspeptine werkt één niveau hoger, op de neuronen die GnRH afgeven. Gonadoreline is zelf GnRH en werkt op de hypofyse.

Het C-terminale amide (de -NH2 op het uiteindelijke fenylalanine) maakt deel uit van het natuurlijke hormoon en is nodig voor volledige activiteit aan de receptor. Het certificaat toont het amide aan.

Tien verzegelde flacons met gevriesdroogde kisspeptine-10, alle uit één batch, met 5 mg of 10 mg per flacon. Eén batchrapport dekt alle tien.

Kisspeptine-10 wordt verzonden als gevriesdroogd poeder in verzegelde flacons, dat tijdens de reis stabiel blijft bij kamertemperatuur. Elke bestelling gaat in neutrale verpakking met tracking en de meeste komen binnen 7 tot 14 dagen aan. Bewaar het in de vriezer bij -20°C zodra het aankomt. Het analysecertificaat voor de batch die we nu verzenden, staat op onze labresultatenpagina.

Onze Kisspeptine-10 overtreft >98% zuiverheid, geverifieerd door omkeerfase-HPLC die een retentietijd laat zien die kenmerkend is voor de decapeptidesequentie (typisch Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 voor humaan KP-10). Elke batch ondergaat uitgebreide kwaliteitscontrole: massaspectrometriebevestiging van het molecuulgewicht (~1302 Da) ter validatie van de volledige tien-aminozuursequentie inclusief C-terminale amidering (cruciaal voor bioactiviteit - niet-geamideerd kisspeptine vertoont aanzienlijk verminderde GPR54-activatie), peptidesequencing via Edman-degradatie of MS/MS-fragmentatie ter verificatie van elk residu en bevestiging van het geconserveerde C-terminale Arg-Phe-NH2-motief dat essentieel is voor receptorbinding, GPR54-receptorbindingsbioassays met GPR54-expresserende cellen (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) die de competitieve verdringing van gelabeld kisspeptine of calciummobilisatie IC50/EC50 meten (typisch 1-10 nM, wat hoge-affiniteitsreceptorherkenning aantoont), functionele LH-secretiebioassays waarbij primaire hypofysegonadotroopculturen of intact hypofyseweefsel worden behandeld met Kisspeptine-10 en LH-afgifte wordt gemeten via ELISA/RIA ter kwantificering van de dosis-respons EC50 (nanomolair bereik), calciummobilisatie-assays met behulp van fluorescente Ca²⁺-indicatoren (Fluo-4, Fura-2) in GPR54-expresserende cellen die aantonen dat Kisspeptine-10 dosisafhankelijk intracellulair Ca²⁺ verhoogt, wat Gq-PLC-IP3-pathway-activatie valideert, receptor-desensibilisatie-assays die aantonen dat continue Kisspeptine-10-blootstelling de respons vermindert in vergelijking met pulsatiele toediening (wat de fysiologische pulsbehoefte valideert), endotoxinetesten (<0.1 EU/mg) en een uitgebreid analysecertificaat.

Naast chemische zuiverheid (HPLC >98%, massaspectrometrie die de decapeptide-sequentie en C-terminale amidering bevestigt), gebruiken we uitgebreide GPR54-receptor- en functionele validatie: (1) C-terminale amideringscontrole: massaspectrometrie die het molecuulgewicht nauwkeurig meet (~1302 Da voor geamideerd versus ~1303 Da voor vrij zuur) en de aanwezigheid van -NH2 bevestigt, wat essentieel is voor bioactiviteit. (2) GPR54-bindingsassays: gebruik van cellen die stabiel menselijk GPR54 tot expressie brengen (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) en de competitieve verdringing van radioactief gemarkeerd kisspeptine ([125I]-kisspeptine) of fluorescerend ligand meten, waarbij IC50 wordt bepaald (doorgaans 1-10 nM) en hoogaffiene receptorherkenning wordt bevestigd. (3) Calciummobilisatie-assays: behandeling van GPR54-expresserende cellen met oplopende doses Kisspeptine-10 en het in realtime meten van intracellulaire Ca²⁺-stijging via Fluo-4- of Fura-2-fluorescentie, waarbij EC50 (nanomolaire range) wordt gekwantificeerd en de activering van de Gq-eiwit-gemedieerde PLC-IP3-Ca²⁺-route wordt aangetoond, die gekoppeld is aan GnRH-secretie. (4) LH-secretie-bioassays: cruciale functionele validatie: behandeling van primaire hypofyse-gonadotroofculturen of hypofyseweefselexplantaten met Kisspeptine-10 en het meten van LH-afgifte in het medium via ELISA of RIA, wat dosisafhankelijke LH-secretie met EC50-kwantificering aantoont en de vertaling van GPR54-activering naar hormonale output valideert. (5) ERK1/2-fosforylering: Western blot die aantoont dat Kisspeptine-10 de MAPK-route activeert in GPR54-expresserende cellen. (6) Receptor-desensitisatiekinetiek: aantonen dat continue blootstelling aan Kisspeptine-10 calciumreacties vermindert in vergelijking met pulsatiele toediening, wat de fysiologische behoefte aan pulsatiele stimulatie valideert. (7) Selectiviteitscontroles: aantonen dat Kisspeptine-10 GPR54-expresserende cellen activeert, maar niet ouderlijke cellen zonder receptor, wat receptor-gemedieerde effecten bevestigt. (8) Vergelijking met niet-geamideerd: indien beschikbaar, aantonen dat geamideerd Kisspeptine-10-NH2 een 100- tot 1000-voudige hogere potentie heeft dan Kisspeptine-10-OH, wat het belang van amidering bevestigt.