Kisspeptin-10

KISS1R, początkowo nazywany GPR54. Znajduje się na neuronach GnRH w mózgu. Osoby bez funkcjonalnej kopii tego genu nigdy nie rozpoczynają dojrzewania płciowego.

Obie pochodzą z tego samego prekursora. Kisspeptyna-54 jest długą formą; kisspeptyna-10 to jej ostatnie dziesięć aminokwasów, czyli część wiążąca się z receptorem. Długa forma utrzymuje się dłużej we krwi.

Kisspeptyna działa o jeden poziom wyżej, na neurony uwalniające GnRH. Gonadorelina to sam GnRH, działający na przysadkę mózgową.

Jej amid C-końcowy (grupa -NH2 na końcowej fenyloalaninie) jest częścią naturalnego hormonu i jest niezbędny do pełnej aktywności wobec receptora. Certyfikat analizy potwierdza obecność amidu.

Dziesięć szczelnie zamkniętych fiolek liofilizowanej kisspeptyny-10, wszystkie z jednej partii, w dawce 5 mg lub 10 mg na fiolkę. Jeden raport partii obejmuje wszystkie dziesięć fiolek.

Kisspeptyna-10 jest wysyłana jako liofilizowany proszek w szczelnie zamkniętych fiolkach, który pozostaje stabilny w temperaturze pokojowej podczas transportu. Każde zamówienie jest wysyłane w nieoznakowanym opakowaniu z numerem do śledzenia, a większość przesyłek dociera w ciągu 7 do 14 dni. Po otrzymaniu przechowywać w zamrażarce w temperaturze -20°C. Certyfikat analizy dla aktualnie wysyłanej partii znajduje się na naszej stronie z wynikami badań laboratoryjnych.

Nasza Kisspeptyna-10 przekracza >98% czystości potwierdzonej metodą HPLC z odwróconymi fazami, wykazującą czas retencji charakterystyczny dla sekwencji dekapeptydu (zazwyczaj Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 dla ludzkiej KP-10). Każda partia przechodzi kompleksową kontrolę jakości: potwierdzenie masy cząsteczkowej (~1302 Da) za pomocą spektrometrii mas, walidujące pełną sekwencję dziesięciu aminokwasów wraz z amidacją C-końcową (krytyczną dla bioaktywności – nieamidowana kisspeptyna wykazuje znacznie zmniejszoną aktywację GPR54), sekwencjonowanie peptydu metodą degradacji Edmana lub fragmentacji MS/MS weryfikujące każdą resztę i potwierdzające konserwatywny motyw C-końcowy Arg-Phe-NH2 niezbędny do wiązania z receptorem, testy wiązania z receptorem GPR54 z użyciem komórek eksprymujących GPR54 (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) mierzące wypieranie znakowanej kisspeptyny przez Kisspeptynę-10 lub mobilizację wapnia IC50/EC50 (zazwyczaj 1-10 nM, wykazujące powinowactwo o wysokim powinowactwie do receptora), funkcjonalne testy wydzielania LH poprzez traktowanie pierwotnych hodowli gonadotropów przysadki lub nienaruszonej tkanki przysadki Kisspeptyną-10 i pomiar uwalniania LH za pomocą ELISA/RIA, określające zależną od dawki EC50 (zakres nanomolarny), testy mobilizacji wapnia z użyciem fluorescencyjnych wskaźników Ca²⁺ (Fluo-4, Fura-2) w komórkach eksprymujących GPR54 wykazujące, że Kisspeptyna-10 w sposób zależny od dawki podnosi wewnątrzkomórkowe stężenie Ca²⁺, potwierdzające aktywację szlaku Gq-PLC-IP3, testy desensytyzacji receptora wykazujące, że ciągła ekspozycja na Kisspeptynę-10 zmniejsza odpowiedź w porównaniu z podawaniem pulsacyjnym (walidujące fizjologiczne zapotrzebowanie na pulsację), testy na obecność endotoksyn (<0,1 EU/mg) oraz kompleksowy Certyfikat Analizy.

Poza czystością chemiczną (HPLC >98%, spektrometria mas potwierdzająca sekwencję dekapeptydu i amidację C-końcową), stosujemy kompleksową walidację receptora GPR54 i funkcji: (1) Weryfikacja amidacji C-końcowej – spektrometria mas precyzyjnie mierząca masę cząsteczkową (~1302 Da dla formy amidowanej vs ~1303 Da dla wolnego kwasu) potwierdzająca obecność -NH2 niezbędną do bioaktywności. (2) Testy wiązania GPR54 – z użyciem komórek stabilnie eksprymujących ludzki GPR54 (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) mierzące wypieranie znakowanego radioaktywnie kisspeptyny ([125I]-kisspeptyna) lub ligandu fluorescencyjnego przez Kisspeptin-10, określające IC50 (zwykle 1-10 nM) i potwierdzające wysokie powinowactwo do receptora. (3) Testy mobilizacji wapnia – traktowanie komórek eksprymujących GPR54 rosnącymi dawkami Kisspeptin-10 i pomiar wewnątrzkomórkowego wzrostu Ca²⁺ w czasie rzeczywistym za pomocą Fluo-4 lub Fura-2, określające EC50 (zakres nanomolowy) i wykazujące aktywację szlaku Gq-PLC-IP3-Ca²⁺, który sprzęga się z wydzielaniem GnRH. (4) Testy bioaktywności wydzielania LH – kluczowa walidacja funkcjonalna: traktowanie pierwotnych hodowli gonadotropów przysadki lub fragmentów przysadki Kisspeptin-10 i pomiar uwalniania LH do pożywki za pomocą ELISA lub RIA, wykazujące zależne od dawki wydzielanie LH z określeniem EC50, co potwierdza przełożenie aktywacji GPR54 na odpowiedź hormonalną. (5) Fosforylacja ERK1/2 – Western blot wykazujący, że Kisspeptin-10 aktywuje szlak MAPK w komórkach eksprymujących GPR54. (6) Kinetyka desensytyzacji receptora – wykazanie, że ciągła ekspozycja na Kisspeptin-10 zmniejsza odpowiedzi wapniowe w porównaniu z podawaniem pulsacyjnym, co potwierdza fizjologiczną potrzebę stymulacji pulsacyjnej. (7) Kontrole selektywności – wykazanie, że Kisspeptin-10 aktywuje komórki eksprymujące GPR54, ale nie komórki rodzicielskie bez receptora, co potwierdza efekty zależne od receptora. (8) Porównanie z formą nieamidowaną – jeśli dostępne, wykazanie, że amidowany Kisspeptin-10-NH2 ma 100-1000 razy większą moc niż Kisspeptin-10-OH, co potwierdza znaczenie amidacji.