Kisspeptin-10

KISS1R, ilk olarak GPR54 olarak adlandırılmıştır. Beyindeki GnRH nöronlarında bulunur. Çalışan bir kopyası olmayan kişiler ergenliğe asla başlamaz.

Her ikisi de aynı öncülden gelir. Kisspeptin-54 uzun formdur; kisspeptin-10 ise reseptöre bağlanan kısmı olan son on amino asididir. Uzun form kanda daha uzun süre kalır.

Kisspeptin, GnRH salgılayan nöronlar üzerinde bir basamak daha yukarıda etki eder. Gonadorelin ise hipofiz bezine etki eden GnRH'nin kendisidir.

C-terminal amid (son fenilalanin üzerindeki -NH2) doğal hormonun bir parçasıdır ve reseptörde tam aktivite için gereklidir. Sertifikası amid grubunu gösterir.

Tek bir partiden, flakon başına 5 mg veya 10 mg olacak şekilde on adet mühürlü liyofilize kisspeptin-10 flakonu. Tek bir parti raporu on flakonun tamamını kapsar.

Kisspeptin-10, nakliye sırasında oda sıcaklığında stabil kalan, mühürlü flakonlarda liyofilize toz olarak gönderilir. Her sipariş, takip numarasıyla birlikte sade ambalajda gönderilir ve çoğu 7 ila 14 gün içinde ulaşır. Geldikten sonra -20°C'de dondurucuda saklayın. Şu anda göndermekte olduğumuz partiye ait Analiz Sertifikası, laboratuvar sonuçları sayfamızdadır.

Kisspeptin-10'umuz, ters fazlı HPLC ile doğrulanmış >%98 saflığı aşar ve dekapeptit dizisine (tipik olarak insan KP-10 için Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2) özgü alıkonma süresini gösterir. Her parti kapsamlı kalite kontrolünden geçer: moleküler ağırlığın (~1302 Da) kütle spektrometrisi ile onaylanması, C-terminal amidasyonu dahil tam on amino asit dizisini doğrular (biyoaktivite için kritiktir - amidlenmemiş kisspeptin, belirgin şekilde azalmış GPR54 aktivasyonu gösterir), Edman degradasyonu veya MS/MS fragmentasyonu yoluyla her bir kalıntıyı doğrulayan ve reseptör bağlanması için gerekli olan korunmuş C-terminal Arg-Phe-NH2 motifini onaylayan peptit dizilemesi, GPR54 eksprese eden hücreler (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) kullanılarak Kisspeptin-10'un radyoetiketli kisspeptinin rekabetçi yer değiştirmesini veya kalsiyum mobilizasyonu IC50/EC50'sini (tipik olarak yüksek afiniteli reseptör tanımasını gösteren 1-10 nM) ölçen GPR54 reseptör bağlanma biyoanalizleri, birincil hipofiz gonadotrop kültürleri veya sağlam hipofiz dokusunu Kisspeptin-10 ile işleme tabi tutan ve doz-yanıt EC50'sini (nanomolar aralık) ölçen ELISA/RIA yoluyla LH salınımını ölçen fonksiyonel LH salgısı biyoanalizleri, GPR54 eksprese eden hücrelerde floresan Ca²⁺ göstergeleri (Fluo-4, Fura-2) kullanılarak Kisspeptin-10'un doza bağlı olarak hücre içi Ca²⁺'yi yükselttiğini ve Gq-PLC-IP3 yolak aktivasyonunu doğruladığını gösteren kalsiyum mobilizasyonu analizleri, sürekli Kisspeptin-10 maruziyetinin aralıklı uygulamaya kıyasla yanıtı azalttığını gösteren (fizyolojik nabız gereksinimini doğrulayan) reseptör duyarsızlaştırma analizleri, endotoksin testi (<0.1 EU/mg) ve kapsamlı Analiz Sertifikası.

Kimyasal saflığın ötesinde (HPLC >98%, kütle spektrometrisi ile dekapeptit diziliminin ve C-terminal amidasyonunun doğrulanması), kapsamlı GPR54 reseptör ve fonksiyonel doğrulama uyguluyoruz: (1) C-terminal amidasyon doğrulaması - moleküler ağırlığı hassas şekilde ölçen kütle spektrometrisi (amidli form için ~1302 Da, serbest asit için ~1303 Da) biyoaktivite için gerekli -NH2 varlığını doğrular. (2) GPR54 bağlanma testleri - insan GPR54'ü stabil şekilde eksprese eden hücreler (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) kullanılarak Kisspeptin-10'un radyoaktif işaretli kisspeptini ([125I]-kisspeptin) veya floresan ligandı rekabetçi yer değiştirmesi ölçülür, IC50 belirlenir (tipik olarak 1-10 nM) ve yüksek afiniteli reseptör tanıması doğrulanır. (3) Kalsiyum mobilizasyon testleri - GPR54 eksprese eden hücrelere artan dozlarda Kisspeptin-10 uygulanarak Fluo-4 veya Fura-2 floresansı ile gerçek zamanlı hücre içi Ca²⁺ yükselişi ölçülür, EC50 (nanomolar aralık) nicelendirilir ve GnRH salgısına bağlanan Gq-protein aracılı PLC-IP3-Ca²⁺ yolunun aktivasyonu gösterilir. (4) LH salgısı biyotayinleri - kritik fonksiyonel doğrulama: birincil hipofiz gonadotrof kültürlerine veya hipofiz doku eksplantlarına Kisspeptin-10 uygulanarak ELISA veya RIA ile ortama salınan LH ölçülür, doza bağlı LH salgısı ve EC50 nicelendirmesi ile GPR54 aktivasyonunun hormonal çıktıya dönüşümü doğrulanır. (5) ERK1/2 fosforilasyonu - Western blot, Kisspeptin-10'un GPR54 eksprese eden hücrelerde MAPK yolunu aktive ettiğini gösterir. (6) Reseptör duyarsızlaşma kinetiği - sürekli Kisspeptin-10 maruziyetinin, pulsatif uygulamaya kıyasla kalsiyum yanıtlarını azalttığı gösterilerek fizyolojik pulsatif uyarım gereksinimi doğrulanır. (7) Seçicilik kontrolleri - Kisspeptin-10'un GPR54 eksprese eden hücreleri aktive ettiği ancak reseptör içermeyen parental hücreleri aktive etmediği gösterilerek reseptör aracılı etkiler doğrulanır. (8) Amidli olmayan karşılaştırma - mevcutsa, amidli Kisspeptin-10-NH2'nin Kisspeptin-10-OH'den 100-1000 kat daha yüksek potens gösterdiği kanıtlanarak amidasyonun önemi doğrulanır.