Kisspeptin-10

KISS1R, d'abord appelé GPR54. Il se trouve sur les neurones à GnRH du cerveau. Les personnes dépourvues d'une copie fonctionnelle ne démarrent jamais la puberté.

Les deux proviennent du même précurseur. La kisspeptine-54 est la forme longue ; la kisspeptine-10 est constituée de ses dix derniers acides aminés, la partie qui se lie au récepteur. La forme longue persiste plus longtemps dans le sang.

La kisspeptine agit un cran plus haut, sur les neurones qui libèrent la GnRH. La gonadolibérine est la GnRH elle-même, agissant sur l'hypophyse.

Son amide C-terminal (le -NH2 sur la phénylalanine finale) fait partie de l'hormone naturelle et est nécessaire à la pleine activité au niveau du récepteur. Son certificat montre l'amide.

Dix flacons scellés de kisspeptine-10 lyophilisée, tous issus d'un même lot, à 5 mg ou 10 mg par flacon. Un rapport de lot couvre les dix.

La kisspeptine-10 est expédiée sous forme de poudre lyophilisée dans des flacons scellés, qui reste stable à température ambiante pendant le transport. Chaque commande part dans un emballage discret avec suivi, et la plupart arrivent sous 7 à 14 jours. Conservez-la au congélateur à -20°C dès réception. Le certificat d'analyse du lot que nous expédions actuellement se trouve sur notre page de résultats de laboratoire.

Notre Kisspeptine-10 dépasse >98 % de pureté vérifiée par HPLC en phase inverse montrant un temps de rétention caractéristique de la séquence décapeptidique (typiquement Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2 pour la KP-10 humaine). Chaque lot subit un contrôle qualité complet : confirmation par spectrométrie de masse du poids moléculaire (~1302 Da) validant la séquence complète de dix acides aminés incluant l'amidation C-terminale (critique pour la bioactivité - la kisspeptine non amidée montre une activation GPR54 nettement réduite), séquençage peptidique par dégradation d'Edman ou fragmentation MS/MS vérifiant chaque résidu et confirmant le motif conservé Arg-Phe-NH2 C-terminal essentiel à la liaison au récepteur, tests de liaison au récepteur GPR54 utilisant des cellules exprimant GPR54 (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) mesurant le déplacement compétitif de la kisspeptine radiomarquée par la Kisspeptine-10 ou la mobilisation calcique IC50/EC50 (typiquement 1-10 nM démontrant une reconnaissance de haute affinité du récepteur), tests fonctionnels de sécrétion de LH traitant des cultures primaires de gonadotropes hypophysaires ou du tissu hypophysaire intact avec la Kisspeptine-10 mesurant la libération de LH par ELISA/ELISA quantifiant la EC50 dose-réponse (gamme nanomolaire), tests de mobilisation calcique utilisant des indicateurs Ca²⁺ fluorescents (Fluo-4, Fura-2) dans des cellules exprimant GPR54 démontrant que la Kisspeptine-10 élève de manière dose-dépendante le Ca²⁺ intracellulaire validant l'activation de la voie Gq-PLC-IP3, tests de désensibilisation du récepteur montrant que l'exposition continue à la Kisspeptine-10 réduit la réponse par rapport à l'administration pulsatile (validant l'exigence physiologique de pulsation), test d'endotoxines (<0,1 UE/mg), et certificat d'analyse complet.

Au-delà de la pureté chimique (HPLC >98 %, spectrométrie de masse confirmant la séquence du décapeptide et l'amidation C-terminale), nous employons une validation complète du récepteur GPR54 et fonctionnelle : (1) Vérification de l'amidation C-terminale - spectrométrie de masse mesurant précisément le poids moléculaire (~1302 Da pour la forme amidée vs ~1303 Da pour l'acide libre) confirmant la présence de -NH2 essentielle à la bioactivité. (2) Essais de liaison GPR54 - utilisant des cellules exprimant stablement le GPR54 humain (CHO-GPR54, HEK293-GPR54) mesurant le déplacement compétitif de la kisspeptine radiomarquée ([125I]-kisspeptine) ou d'un ligand fluorescent par la Kisspeptine-10, déterminant l'IC50 (généralement 1-10 nM) confirmant la reconnaissance du récepteur à haute affinité. (3) Essais de mobilisation du calcium - traitement de cellules exprimant GPR54 avec des doses croissantes de Kisspeptine-10 mesurant l'élévation du Ca²⁺ intracellulaire en temps réel via la fluorescence Fluo-4 ou Fura-2, quantifiant l'EC50 (gamme nanomolaire) démontrant l'activation de la voie Gq-protéine-PLC-IP3-Ca²⁺ qui se couple à la sécrétion de GnRH. (4) Essais de sécrétion de LH - validation fonctionnelle critique : traitement de cultures primaires de gonadotropes hypophysaires ou d'explants de tissu hypophysaire avec la Kisspeptine-10 mesurant la libération de LH dans le milieu via ELISA ou RIA, démontrant une sécrétion de LH dépendante de la dose avec quantification de l'EC50 validant la traduction de l'activation de GPR54 en sortie hormonale. (5) Phosphorylation d'ERK1/2 - Western blot montrant que la Kisspeptine-10 active la voie MAPK dans les cellules exprimant GPR54. (6) Cinétique de désensibilisation du récepteur - démontrant qu'une exposition continue à la Kisspeptine-10 réduit les réponses calciques par rapport à une administration pulsatile, validant l'exigence physiologique d'une stimulation pulsatile. (7) Contrôles de sélectivité - montrant que la Kisspeptine-10 active les cellules exprimant GPR54 mais pas les cellules parentales dépourvues du récepteur, confirmant les effets médiés par le récepteur. (8) Comparaison non amidée - si disponible, démontrant que la Kisspeptine-10-NH2 amidée montre une puissance 100 à 1000 fois supérieure à la Kisspeptine-10-OH validant l'importance de l'amidation.