Metody analityczne stojące za każdym świadectwem

Oddziela docelowy peptyd od zanieczyszczeń procesowych na podstawie hydrofobowości i raportuje czystość jako procent całkowitej powierzchni pików przy ustalonej długości fali detekcji.

Potwierdza tożsamość poprzez pomiar masy cząsteczkowej eluowanego materiału i porównanie jej z teoretyczną masą sekwencji.

Zawartość wody w liofilizowanym ciele stałym, metodą miareczkowania, a nie suszenia do stałej masy.

Obciążenie endotoksynami, w jednostkach endotoksyn na miligram, oznaczane testem LAL (lizat amebocytów krabów podkowiastych), zwykle w wariancie kinetyczno-chromogennym.

Rozdziela na podstawie pozornej masy cząsteczkowej w żelu i jest stosowana w przypadku większych białek w katalogu, gdzie kolumna z odwróconymi fazami denaturowałaby cząsteczkę.

Agregaty i cząsteczki o dużej masie cząsteczkowej, raportowane jako zawartość monomeru. Dla białka sfałdowanego to, a nie powierzchnia w odwróconej fazie, jest miarodajnym wskaźnikiem czystości.

Zawartość metali śladowych, w tym metali ciężkich oraz, gdy peptyd jest dostarczany jako kompleks metalu, samego zamierzonego metalu.

Zawartość przeciwjonu, zwykle octanu lub trifluoroctanu pozostałego po oczyszczaniu.

Lotny rozpuszczalnik organiczny przeniesiony z syntezy i oczyszczania, metodą chromatografii gazowej z analizą fazy nadpowierzchniowej.

Stężenie peptydu lub białka, zawartość wolnych grup tiolowych, azot całkowity i pH. Są to oznaczenia, które przekształcają procent powierzchni w rzeczywistą ilość substancji.

Aktywność biologiczna w układzie komórkowym lub wiążącym, stosowana, gdy wartość cząsteczki zależy od tego, czy działa, a nie tylko od tego, że jest obecna i czysta.

Wygląd liofilizowanego ciasta oraz roztworu po rekonstytucji, a także liczba cząstek podprogowych, jeśli ma zastosowanie.

Jakie metody analityczne są używane do testowania peptydów badawczych?

Odwrócona faza HPLC dla czystości, spektrometria mas dla identyfikacji i miareczkowanie Karla Fischera dla zawartości wody to trzy podstawowe metody dla peptydu syntetycznego. Endotoksyny bakteryjne metodą LAL, wygląd, pH i substancje pokrewne są rutynowo dodawane. Większe białka przechodzą na SDS-PAGE i HPLC z wykluczaniem wielkości, ponieważ warunki z odwróconą fazą denaturują je, a kompleksy metali dodają analizę pierwiastkową metodą ICP.

Czy wysoki wynik czystości HPLC oznacza, że fiolka zawiera tyle peptydu?

Nie, i to jest najczęściej błędnie odczytywana liczba w tej dziedzinie. Czystość HPLC to procent powierzchni: udział piku docelowego w tym, co wykrył detektor. Woda, sól i przeciwjon nie absorbują przy długości fali detekcji, więc nie są w ogóle uwzględniane w tym obliczeniu. Fiolka może być w 99 procentach czysta według HPLC i nadal zawierać znaczący ułamek wody i octanu pod względem masy, dlatego zawartość wody i zawartość przeciwjonu są oddzielnymi oznaczeniami na tym samym certyfikacie.

Czy laboratorium badawcze jest akredytowane ISO 17025?

Analiza potwierdzająca jest wykonywana w laboratorium posiadającym akredytację ISO/IEC 17025, międzynarodowy standard kompetencji laboratoriów badawczych. Warto wiedzieć, jak działa ten standard: jest przyznawany laboratoriom, a nie dostawcom, więc sprzedawca twierdzący, że sam posiada akredytację 17025, opisuje coś, co nie istnieje, chyba że prowadzi własne akredytowane laboratorium. Liczy się akredytacja laboratorium wykonującego badanie, jej zakres oraz to, czy numer certyfikatu można zweryfikować u jednostki wydającej. Wszystkie trzy informacje są publikowane na stronie jakości i badań.

Co oznacza kolumna specyfikacji na Certyfikacie Analizy?

To limit uzgodniony przed uruchomieniem próbki. Wynik ma sens tylko w odniesieniu do specyfikacji, ponieważ to specyfikacja sprawia, że wynik jest zaliczony lub niezaliczony, a nie tylko liczbą. Certyfikat, który podaje wyniki bez kolumny specyfikacji, nie przetestował niczego, jedynie zmierzył.

Dlaczego panele testów różnią się między związkami?

Ponieważ metoda musi być dopasowana do cząsteczki. Przeprowadzenie gradientu w fazie odwróconej na sfałdowanym białku denaturuje je, więc jego wartość czystości byłaby bez znaczenia; właściwą miarą jest natomiast zawartość monomeru metodą chromatografii żelowej. Peptyd związany z miedzią wymaga analizy elementarnej, której zwykły peptyd nie wymaga. Identyczny panel dla każdego produktu w katalogu to znak, że panel został zaprojektowany dla wyglądu, a nie dla chemii.