MGF

Cả hai đều có nguồn gốc từ gen IGF-1. IGF-1 trưởng thành lưu thông khắp cơ thể và giúp tế bào trưởng thành. MGF là phần cuối của một dạng ghép nối cơ, được tạo ra tại chỗ sau khi chịu tải hoặc chấn thương, và giữ cho các tế bào tiền thân cơ tiếp tục phân chia.

MGF phân hủy trong vòng vài phút. PEG MGF mang một chuỗi polyethylene glycol lớn che chắn nó, do đó nó tồn tại lâu hơn nhiều. MGF phù hợp với các tín hiệu ngắn, cục bộ; PEG MGF phù hợp với các nghiên cứu dài hơn.

Bởi vì cơ sản xuất nó để đáp ứng với tải trọng cơ học hoặc tổn thương. Tên gọi này đến từ nhóm của Geoffrey Goldspink, người đã mô tả nó.

Mười lọ kín chứa MGF đông khô, mỗi lọ 2 mg, tất cả từ một lô. Một báo cáo lô bao gồm tất cả mười lọ.

Giữ các lọ kín ở -20°C. Sau khi pha, giữ ở 2 đến 8°C và sử dụng trong vòng 14 ngày. Nó tồn tại ngắn trong dung dịch, vì vậy chỉ pha lượng cần thiết cho một nghiên cứu.

MGF được vận chuyển dưới dạng bột đông khô trong lọ kín, giữ ổn định ở nhiệt độ phòng trong suốt hành trình. Mọi đơn hàng đều được gửi trong bao bì trơn có mã theo dõi, và hầu hết đến trong vòng 7 đến 14 ngày. Bảo quản trong tủ đông ở -20°C khi nhận được. Giấy chứng nhận phân tích cho lô chúng tôi đang giao hàng có trên trang kết quả phòng thí nghiệm của chúng tôi.

MGF của chúng tôi vượt quá độ tinh khiết >98% được xác nhận bằng HPLC với kiểm soát chất lượng toàn diện cho peptide biến thể ghép nối IGF-1Ec. Mỗi lô trải qua: xác nhận khối lượng phân tử bằng khối phổ cho toàn bộ trình tự MGF bao gồm phần mở rộng đầu C miền E độc đáo (khối lượng phân tử thay đổi tùy theo cấu trúc MGF cụ thể - thường là đoạn đầu C hoạt tính sinh học hoặc toàn bộ chiều dài), xác nhận trình tự peptide xác nhận trình tự miền E có nguồn gốc từ chèn 52 cặp base độc đáo phân biệt MGF với IGF-1Ea toàn thân, HPLC cho thấy một đỉnh chính duy nhất với thời gian lưu thích hợp, xét nghiệm sinh học tăng sinh tế bào vệ tinh đo khả năng của MGF trong việc kích thích hoạt hóa và tăng sinh tế bào vệ tinh ở trạng thái nghỉ trong nuôi cấy tế bào vệ tinh cơ chính (thường sử dụng nguyên bào cơ C2C12 hoặc tế bào vệ tinh có nguồn gốc chính), cho thấy mức tăng sinh gấp nhiều lần so với đối chứng xe, so sánh hoạt tính sinh học với IGF-1 cho thấy các cấu hình hiệu lực riêng biệt trong xét nghiệm tế bào vệ tinh so với tế bào ống cơ biệt hóa, sàng lọc nội độc tố (<0.1 EU/mg), và Giấy chứng nhận phân tích toàn diện. Độ tinh khiết >98% đảm bảo hoạt hóa tế bào vệ tinh có thể tái lập, hiệu quả tăng sinh nguyên bào cơ nhất quán, và nghiên cứu tái tạo cơ đáng tin cậy mà không bị nhiễu từ các sản phẩm phân hủy hoặc biến thể ghép nối không chính xác. Tất cả các thử nghiệm đều xác nhận cả danh tính hóa học (trình tự miền E chính xác độc đáo của MGF) và hoạt tính sinh học (kích thích tế bào vệ tinh) cần thiết cho nghiên cứu sửa chữa và tái tạo cơ đáng tin cậy, phân biệt MGF với các đồng dạng IGF-1 khác.

Ngoài độ tinh khiết hóa học (HPLC, khối phổ xác nhận biến thể nối IGF-1Ec đúng với trình tự vùng E duy nhất), chúng tôi thực hiện các xét nghiệm sinh học chức năng toàn diện: (1) Xét nghiệm tăng sinh tế bào vệ tinh - xử lý tế bào vệ tinh cơ nguyên phát ở trạng thái nghỉ hoặc nguyên bào cơ C2C12 với MGF và đo sự tăng sinh qua sự kết hợp BrdU, gắn nhãn EdU hoặc đếm tế bào trong 24-72 giờ, cho thấy sự tăng sinh phụ thuộc liều (thường tăng 2-4 lần so với đối chứng xe ở nồng độ tối ưu), (2) Xét nghiệm kích hoạt tế bào vệ tinh - đo sự chuyển từ trạng thái nghỉ (Pax7+/MyoD-) sang trạng thái kích hoạt (Pax7+/MyoD+) qua miễn dịch huỳnh quang hoặc đo tế bào dòng chảy cho thấy sự kích hoạt do MGF gây ra, (3) Thời điểm biệt hóa nguyên bào cơ - xử lý nuôi cấy trong suốt quá trình chuyển từ tăng sinh sang biệt hóa cho thấy MGF duy trì trạng thái tăng sinh và trì hoãn biệt hóa so với IGF-1 toàn thân thúc đẩy biệt hóa, (4) So sánh hiệu lực với IGF-1 - thử nghiệm song song cho thấy hoạt động tăng sinh tế bào vệ tinh ưu tiên của MGF so với tác dụng thúc đẩy biệt hóa của IGF-1 toàn thân, (5) Đặc tính đáp ứng liều - thiết lập giá trị EC50 cho sự tăng sinh trong các loại tế bào liên quan, (6) Kích hoạt đường truyền tín hiệu - Western blot chứng minh quá trình phosphoryl hóa các đường PI3K-Akt, MAPK-ERK do MGF gây ra (tương tự IGF-1) nhưng có thể có động học hoặc cường độ khác biệt phản ánh vùng E duy nhất, và (7) Xác nhận danh tính biến thể nối - RT-PCR hoặc giải trình tự xác nhận MGF là dạng IGF-1Ec chứ không phải IGF-1Ea. CoA bao gồm dữ liệu tăng sinh tế bào vệ tinh (mức tăng so với đối chứng, giá trị EC50) và xác minh biến thể nối đảm bảo bạn nhận được MGF xác thực chứ không phải IGF-1 toàn thân. Các xét nghiệm này xác nhận đặc tính xác định của MGF - kích hoạt tế bào vệ tinh mạnh mẽ và tăng sinh nguyên bào cơ khác biệt so với tác dụng thúc đẩy biệt hóa của IGF-1 toàn thân.