LL37

มีกรดอะมิโน 37 ตัว และสองตัวแรกคือลิวซีน (L และ L) มันถูกตัดมาจากโปรตีนขนาดใหญ่ที่ชื่อว่า hCAP18

รูปร่างเกลียวของมันมีด้านที่มีประจุและด้านที่มัน มันจะเกาะติดกับเยื่อหุ้มแบคทีเรียซึ่งมีประจุลบมากกว่าเซลล์มนุษย์ และเจาะรูบนเยื่อหุ้มนั้น

ในการศึกษาในห้องปฏิบัติการ มันสามารถสลายไบโอฟิล์ม ซึ่งเป็นฟิล์มป้องกันที่แบคทีเรียสร้างขึ้น และป้องกันการเกิดไบโอฟิล์มใหม่

ขวดปิดผนึก 10 ขวดที่บรรจุ LL-37 แบบแห้งเยือกแข็ง ขวดละ 5 มก. ทั้งหมดมาจากล็อตเดียวกัน รายงานผลล็อตเดียวครอบคลุมทั้ง 10 ขวด

เก็บขวดที่ปิดผนึกไว้ที่ -20°C เมื่อผสมแล้ว ให้เก็บไว้ที่ 2 ถึง 8°C และใช้ภายใน 14 วัน

LL37 จัดส่งเป็นผงแห้งเยือกแข็งในขวดปิดผนึก ซึ่งคงตัวที่อุณหภูมิห้องระหว่างการเดินทาง ทุกคำสั่งซื้อจะจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ธรรมดาพร้อมหมายเลขติดตาม และส่วนใหญ่จะถึงภายใน 7 ถึง 14 วัน เมื่อได้รับแล้วให้เก็บในช่องแช่แข็งที่ -20°C ใบรับรองการวิเคราะห์ (Certificate of Analysis) สำหรับล็อตที่เรากำลังจัดส่งอยู่ในขณะนี้อยู่ที่หน้า lab-results ของเรา

LL37 ของเรามีความบริสุทธิ์เกิน >98% ซึ่งได้รับการยืนยันโดย reverse-phase HPLC ที่แสดงเวลา retention time ที่เป็นลักษณะเฉพาะของลำดับ cathelicidin ที่มี 37 กรดอะมิโน แต่ละล็อตผ่านการควบคุมคุณภาพอย่างครอบคลุม: การยืนยันน้ำหนักโมเลกุลด้วย mass spectrometry (~4493 Da) ซึ่งยืนยันลำดับ Leu-Leu-Gly-Asp-Phe-Phe-Arg-Lys-Ser-Lys-Glu-Lys-Ile-Gly-Lys-Glu-Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Asn-Leu-Val-Pro-Arg-Thr-Glu-Ser ที่สมบูรณ์, การจัดลำดับเปปไทด์ผ่าน MS/MS fragmentation หรือ Edman degradation ซึ่งยืนยันกรดอะมิโนแต่ละตัว (ให้ความสำคัญเป็นพิเศษกับ Lys 6 ตัว, Arg 6 ตัว, Phe 4 ตัว, Leu 3 ตัวซึ่งมีความสำคัญต่อโครงสร้าง-ฤทธิ์ของสารต้านจุลชีพ), การวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดอะมิโนซึ่งวัดปริมาณแต่ละเรซิดิวเพื่อยืนยันความถูกต้องของลำดับและประจุสุทธิ +6, การทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพเชิงหน้าที่ซึ่งวัดฤทธิ์ต้านจุลชีพรวมถึงการทดสอบการฆ่าแบคทีเรียโดยใช้แบคทีเรียแกรมบวก (S. aureus ATCC 25923 รวมถึงสายพันธุ์ MRSA) และแบคทีเรียแกรมลบ (E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa PAO1) ที่เพาะเลี้ยงจนถึงระยะ log-phase และบำบัดด้วย LL37 ในขนาดที่เพิ่มขึ้นเป็นเวลา 1-3 ชั่วโมงเพื่อวัดการลดลงของ colony forming units (CFU) ซึ่งแสดงการฆ่าแบบขึ้นกับขนาดยา พร้อมการวัดค่า minimum inhibitory concentration (MIC) และ minimum bactericidal concentration (MBC) (ช่วง MIC ทั่วไปคือ 0.5-8 μg/mL ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์), จลนพลศาสตร์การฆ่าแบบเวลา (time-kill kinetics) ซึ่งแสดงฤทธิ์ฆ่าแบคทีเรียอย่างรวดเร็ว (<1 ชั่วโมงสำหรับสายพันธุ์ส่วนใหญ่), การตรวจสอบสเปกตรัมของแบคทีเรียแกรมบวกเทียบกับแกรมลบ, การทดสอบฤทธิ์ต่อเชื้อราด้วย C. albicans ซึ่งแสดงศักยภาพในการต้านเชื้อรา, การทดสอบการทำลายเยื่อหุ้มเซลล์โดยใช้ propidium iodide uptake, SYTOX Green staining หรือ lactate dehydrogenase release ซึ่งยืนยันว่า LL37 ทำให้เกิดการซึมผ่านของเยื่อหุ้มเซลล์, การทดสอบการสลายไบโอฟิล์มซึ่งแสดงว่า LL37 ลดไบโอฟิล์มของ P. aeruginosa หรือ S. aureus ที่ก่อตัวไว้แล้วโดยวัดด้วย crystal violet staining หรือ metabolic activity (XTT reduction), การทดสอบฤทธิ์เคมีดึงดูด (chemotactic activity) ซึ่งแสดงว่า LL37 ดึงดูดนิวโทรฟิลหรือโมโนไซต์โดยใช้ transwell migration assays พร้อมการวัดการตอบสนองต่อขนาดยา, การทดสอบการปรับเปลี่ยนไซโตไคน์โดยบำบัด PBMCs หรือมาโครฟาจด้วย LL37 +/- LPS และวัดการเหนี่ยวนำ IL-8 และการปรับเปลี่ยน TNF-α ผ่าน ELISA, การทดสอบการทำให้เอนโดท็อกซินเป็นกลางซึ่งแสดงว่า LL37 ยับยั้งการกระตุ้น NF-κB หรือการผลิตไซโตไคน์ที่เกิดจาก LPS, การตรวจด้วย circular dichroism (CD) spectroscopy ซึ่งยืนยันการสร้างโครงสร้าง α-helical ในสภาพแวดล้อมที่เลียนแบบเยื่อหุ้มเซลล์ (SDS micelles, phospholipid vesicles) พร้อมการวัดปริมาณของ helical content, การทดสอบเอนโดท็อกซิน (<0.1 EU/mg ผ่าน LAL assay ซึ่งสำคัญสำหรับ LL37 เนื่องจากใช้ในการวิจัยที่เกี่ยวข้องกับ LPS) และใบรับรองการวิเคราะห์ (Certificate of Analysis) ที่ครอบคลุม การจัดการเปปไทด์ที่มีประจุบวก: ประจุบวกของ LL37 อาจทำให้เกิดการจับแบบไม่จำเพาะกับพื้นผิวที่มีประจุลบ (แก้ว พลาสติกบางชนิด) เราแนะนำให้ใช้หลอดชนิด low-binding และรวมโปรตีนตัวพา (0.1% BSA) ในสารละลายทำงานสำหรับความเข้มข้นที่เจือจางเพื่อป้องกันการสูญเสียจากการดูดซับที่พื้นผิว