วิธีการวิเคราะห์ที่อยู่เบื้องหลังใบรับรองทุกฉบับ

แยกเปปไทด์เป้าหมายจากสิ่งเจือปนจากกระบวนการด้วยคุณสมบัติไม่ชอบน้ำ และรายงานความบริสุทธิ์เป็นเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่พีคทั้งหมดที่ความยาวคลื่นตรวจจับคงที่

ยืนยันเอกลักษณ์โดยการวัดมวลโมเลกุลของสารที่ถูกชะออกมาและเปรียบเทียบกับมวลทางทฤษฎีของลำดับ

ปริมาณน้ำในของแข็งที่ผ่านการทำแห้งแช่แข็ง โดยการไทเทรตแทนการหาการสูญเสียน้ำหนักเมื่อทำให้แห้ง

ปริมาณเอนโดทอกซิน ในหน่วยเอนโดทอกซินต่อมิลลิกรัม โดยวิธีไลเสตอะมีโบไซต์ของลิมูลัส โดยทั่วไปเป็นแบบไคเนติกโครโมเจนิก

แยกตามน้ำหนักโมเลกุลปรากฏบนเจล และใช้สำหรับโปรตีนขนาดใหญ่ในแคตตาล็อกที่คอลัมน์รีเวิร์สเฟสจะทำให้โมเลกุลเสียสภาพ

สารรวมกลุ่มและสปีชีส์น้ำหนักโมเลกุลสูง รายงานเป็นปริมาณโมโนเมอร์ สำหรับโปรตีนที่พับตัวแล้ว ค่านี้ไม่ใช่พื้นที่รีเวิร์สเฟส คือค่าความบริสุทธิ์ที่มีความหมาย

ปริมาณโลหะ trace รวมถึงโลหะหนัก และในกรณีที่เปปไทด์ถูกส่งเป็นสารเชิงซ้อนโลหะ ตัวโลหะที่ตั้งใจไว้ด้วย

ปริมาณเคาน์เตอร์ไอออน โดยทั่วไปคืออะซิเตตหรือไตรฟลูออโรอะซิเตตที่เหลือจากกระบวนการทำให้บริสุทธิ์

ตัวทำละลายอินทรีย์ระเหยที่ตกค้างมาจากการสังเคราะห์และการทำให้บริสุทธิ์ โดยใช้แก๊สโครมาโทกราฟีแบบเฮดสเปซ

ความเข้มข้นของเปปไทด์หรือโปรตีน ปริมาณไทออลอิสระ ไนโตรเจนทั้งหมด และค่า pH สิ่งเหล่านี้คือการวัดที่เปลี่ยนพื้นที่เปอร์เซ็นต์ให้เป็นปริมาณสารที่แท้จริง

ฤทธิ์ทางชีวภาพในเซลล์หรือระบบจับยึด ใช้ในกรณีที่คุณค่าของโมเลกุลขึ้นอยู่กับการทำหน้าที่บางอย่าง มากกว่าการมีอยู่และความบริสุทธิ์เพียงอย่างเดียว

ลักษณะของเค้กที่ผ่านการทำแห้งแช่แข็งและสารละลายที่ละลายกลับ และจำนวนอนุภาคที่มองไม่เห็นด้วยตาเปล่าในกรณีที่เกี่ยวข้อง

วิธีการวิเคราะห์ใดบ้างที่ใช้ทดสอบเปปไทด์สำหรับการวิจัย?

รีเวิร์สเฟส HPLC สำหรับความบริสุทธิ์ แมสสเปกโตรเมทรีสำหรับการยืนยันเอกลักษณ์ และคาร์ล ฟิชเชอร์ ไทเทรชันสำหรับปริมาณน้ำ เป็นสามวิธีหลักสำหรับเปปไทด์สังเคราะห์ เอนโดทอกซินจากแบคทีเรียโดยวิธี LAL ลักษณะที่ปรากฏ ค่า pH และสารที่เกี่ยวข้องถูกเพิ่มเป็นประจำ โปรตีนขนาดใหญ่จะใช้ SDS-PAGE และ HPLC แบบแยกขนาด เนื่องจากสภาวะรีเวิร์สเฟสทำให้โปรตีนเสียสภาพ และสารเชิงซ้อนโลหะเพิ่มการวิเคราะห์ธาตุโดย ICP

ผลความบริสุทธิ์ HPLC ที่สูงหมายความว่าในขวดมีเปปไทด์ในปริมาณนั้นหรือไม่?

ไม่ใช่ และนี่คือตัวเลขที่ถูกอ่านผิดมากที่สุดเพียงหนึ่งเดียวในสาขานี้ ความบริสุทธิ์ HPLC คือเปอร์เซ็นต์พื้นที่: พีคเป้าหมายเป็นสัดส่วนของทุกสิ่งที่เครื่องตรวจวัด น้ำ เกลือ และ counter-ion ไม่ดูดซับที่ความยาวคลื่นที่ตรวจวัด ดังนั้นจึงไม่รวมอยู่ในการคำนวณนั้นเลย ขวดหนึ่งอาจมีความบริสุทธิ์ 99 เปอร์เซ็นต์โดย HPLC และยังคงเป็นเศษส่วนที่มีนัยสำคัญของน้ำและอะซิเตตโดยมวล ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมปริมาณน้ำและปริมาณ counter-ion จึงเป็นการตรวจวัดแยกกันในใบรับรองเดียวกัน

ห้องปฏิบัติการทดสอบได้รับการรับรอง ISO 17025 หรือไม่?

การวิเคราะห์ยืนยันดำเนินการที่ห้องปฏิบัติการที่ได้รับการรับรอง ISO/IEC 17025 ซึ่งเป็นมาตรฐานสากลสำหรับความสามารถของห้องปฏิบัติการทดสอบ ควรทราบว่ามาตรฐานนี้ทำงานอย่างไร: มาตรฐานนี้มอบให้แก่ห้องปฏิบัติการ ไม่ใช่ผู้จัดจำหน่าย ดังนั้นผู้ขายที่อ้างว่าตนเองได้รับการรับรอง 17025 กำลังอธิบายสิ่งที่ไม่มีอยู่จริง เว้นแต่จะดำเนินการห้องปฏิบัติการที่ได้รับการรับรองของตนเอง สิ่งที่สำคัญคือการรับรองของห้องปฏิบัติการที่ทำงาน ขอบข่ายการรับรอง และว่าหมายเลขใบรับรองสามารถตรวจสอบได้กับหน่วยผู้ออกใบรับรองหรือไม่ ทั้งสามประการเผยแพร่บนหน้าคุณภาพและการทดสอบ

คอลัมน์ข้อกำหนดบนใบรับรองการวิเคราะห์หมายความว่าอย่างไร

มันคือขีดจำกัดที่ตกลงกันก่อนที่จะทดสอบตัวอย่าง ผลลัพธ์จะมีความหมายก็ต่อเมื่อมีข้อกำหนดเฉพาะ เพราะข้อกำหนดเฉพาะคือสิ่งที่ทำให้ผลลัพธ์ผ่านหรือไม่ผ่าน ไม่ใช่แค่ตัวเลข ใบรับรองที่รายงานผลโดยไม่มีคอลัมน์ข้อกำหนดเฉพาะ ไม่ได้ทดสอบอะไรเลย แค่เพียงวัดค่าเท่านั้น

ทำไมชุดการทดสอบจึงแตกต่างกันระหว่างสารประกอบ?

เพราะวิธีการต้องเหมาะสมกับโมเลกุล การใช้รีเวิร์สเฟสเกรเดียนต์กับโปรตีนที่พับตัวจะทำให้โปรตีนเสียสภาพ ดังนั้นค่าความบริสุทธิ์จึงไม่มีความหมาย ควรใช้ปริมาณโมโนเมอร์โดย size-exclusion แทน สารเชิงซ้อนทองแดงต้องใช้การวิเคราะห์ธาตุซึ่งเปปไทด์ทั่วไปไม่ต้องใช้ ชุดการวิเคราะห์ที่เหมือนกันทุกผลิตภัณฑ์ในแคตตาล็อกเป็นสัญญาณว่าชุดนั้นถูกออกแบบมาเพื่อรูปลักษณ์ ไม่ใช่เพื่อเคมี