LL37

Nó có 37 axit amin, và hai axit amin đầu tiên là leucine (L và L). Nó được cắt từ một protein lớn hơn có tên là hCAP18.

Hình dạng xoắn ốc của nó có một mặt tích điện và một mặt dầu. Nó bám vào màng vi khuẩn, vốn mang điện tích âm nhiều hơn tế bào người, và đục lỗ trên màng đó.

Trong các nghiên cứu trong phòng thí nghiệm, nó phá vỡ màng sinh học, lớp màng bảo vệ mà vi khuẩn tạo ra, và ngăn chặn sự hình thành màng mới.

Mười lọ kín chứa LL-37 đông khô, mỗi lọ 5 mg, tất cả từ một lô sản xuất. Một báo cáo lô sản xuất bao gồm tất cả mười lọ.

Giữ các lọ kín ở -20°C. Sau khi pha, giữ ở 2 đến 8°C và sử dụng trong vòng 14 ngày.

LL37 được vận chuyển dưới dạng bột đông khô trong các lọ kín, giữ ổn định ở nhiệt độ phòng trong suốt hành trình. Mỗi đơn hàng được gửi trong bao bì trơn, có mã theo dõi, và hầu hết đến trong vòng 7 đến 14 ngày. Khi nhận được, hãy bảo quản trong tủ đông ở -20°C. Giấy chứng nhận phân tích (Certificate of Analysis) cho lô sản xuất chúng tôi đang gửi hiện có trên trang kết quả phòng thí nghiệm (lab-results) của chúng tôi.

LL37 của chúng tôi vượt quá độ tinh khiết >98% được xác nhận bằng HPLC pha đảo, thể hiện thời gian lưu đặc trưng của trình tự cathelicidin gồm 37 axit amin. Mỗi lô sản xuất trải qua kiểm soát chất lượng toàn diện: xác nhận khối lượng phân tử (~4493 Da) bằng khối phổ, xác thực trình tự hoàn chỉnh Leu-Leu-Gly-Asp-Phe-Phe-Arg-Lys-Ser-Lys-Glu-Lys-Ile-Gly-Lys-Glu-Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Asn-Leu-Val-Pro-Arg-Thr-Glu-Ser, giải trình tự peptide bằng MS/MS phân mảnh hoặc phân giải Edman xác minh từng axit amin (đặc biệt chú ý đến 6 gốc Lys, 6 gốc Arg, 4 gốc Phe, 3 gốc Leu quan trọng cho cấu trúc-hoạt tính kháng khuẩn), phân tích thành phần axit amin định lượng từng gốc xác nhận độ trung thực của trình tự và điện tích thực +6, xét nghiệm chức năng sinh học đo hoạt tính kháng khuẩn bao gồm xét nghiệm tiêu diệt vi khuẩn sử dụng vi khuẩn Gram dương (S. aureus ATCC 25923, bao gồm các chủng MRSA) và Gram âm (E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa PAO1) được nuôi cấy đến pha log và xử lý với LL37 tăng dần liều trong 1-3 giờ, đo mức giảm đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) cho thấy khả năng tiêu diệt phụ thuộc liều với định lượng nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) và nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) (MIC điển hình trong khoảng 0,5-8 μg/mL tùy theo chủng), động học thời gian tiêu diệt cho thấy hoạt tính diệt khuẩn nhanh (<1 giờ đối với hầu hết các chủng), xác nhận phổ hoạt tính trên Gram dương so với Gram âm, xét nghiệm hoạt tính kháng nấm sử dụng C. albicans cho thấy hiệu lực kháng nấm, xét nghiệm phá vỡ màng sử dụng hấp thu propidium iodide, nhuộm SYTOX Green, hoặc giải phóng lactate dehydrogenase xác nhận LL37 gây ra hiện tượng thấm màng, xét nghiệm phá vỡ màng sinh học cho thấy LL37 làm giảm màng sinh học P. aeruginosa hoặc S. aureus đã hình thành trước đó được đo bằng nhuộm tinh thể tím hoặc hoạt tính chuyển hóa (khử XTT), xét nghiệm hoạt tính hóa hướng động cho thấy LL37 thu hút bạch cầu trung tính hoặc bạch cầu đơn nhân sử dụng xét nghiệm di chuyển xuyên giếng (transwell) với định lượng đáp ứng liều, xét nghiệm điều chế cytokine xử lý PBMC hoặc đại thực bào với LL37 +/- LPS đo cảm ứng IL-8 và điều chế TNF-α thông qua ELISA, xét nghiệm trung hòa nội độc tố cho thấy LL37 ức chế hoạt hóa NF-κB hoặc sản xuất cytokine do LPS gây ra, quang phổ lưỡng sắc tròn (CD) xác nhận sự hình thành cấu trúc xoắn alpha trong môi trường mô phỏng màng (micelle SDS, túi phospholipid) với định lượng hàm lượng xoắn, kiểm tra nội độc tố (<0,1 EU/mg thông qua xét nghiệm LAL - rất quan trọng đối với LL37 vì nó được sử dụng trong nghiên cứu liên quan đến LPS), và Giấy chứng nhận phân tích toàn diện. Xử lý peptide cation: Điện tích dương của LL37 có thể gây ra liên kết không đặc hiệu với các bề mặt tích điện âm (thủy tinh, một số loại nhựa); chúng tôi khuyến nghị sử dụng ống liên kết thấp và bao gồm các protein mang (0,1% BSA) trong dung dịch làm việc cho các nồng độ loãng để ngăn ngừa tổn thất do hấp phụ bề mặt.