LL37

È composto da 37 amminoacidi e i primi due sono leucine (L e L). Deriva dal taglio di una proteina più grande chiamata hCAP18.

La sua forma a spirale ha un lato carico e un lato oleoso. Si attacca alle membrane batteriche, che portano una carica più negativa rispetto alle cellule umane, e vi apre dei fori.

In studi di laboratorio rompe i biofilm, le pellicole protettive che i batteri costruiscono, e impedisce la formazione di nuovi.

Dieci flaconcini sigillati di LL-37 liofilizzato, da 5 mg ciascuno, tutti dello stesso lotto. Un unico rapporto di lotto copre tutti e dieci.

Conservare i flaconcini sigillati a -20°C. Una volta ricostituito, conservarlo a una temperatura compresa tra 2 e 8°C e utilizzarlo entro 14 giorni.

LL37 viene spedito come polvere liofilizzata in flaconcini sigillati, che rimane stabile a temperatura ambiente per il trasporto. Ogni ordine viene spedito in imballaggio neutro con tracciabilità e la maggior parte arriva entro 7-14 giorni. Una volta arrivato, conservarlo nel congelatore a -20°C. Il Certificato di Analisi per il lotto che stiamo attualmente spedendo è disponibile sulla nostra pagina dei risultati di laboratorio.

Il nostro LL37 supera il >98% di purezza verificata mediante HPLC in fase inversa che dimostra un tempo di ritenzione caratteristico della sequenza catelicidina di 37 amminoacidi. Ogni lotto è sottoposto a un controllo qualità completo: conferma della massa molecolare mediante spettrometria di massa (~4493 Da) che convalida l'intera sequenza Leu-Leu-Gly-Asp-Phe-Phe-Arg-Lys-Ser-Lys-Glu-Lys-Ile-Gly-Lys-Glu-Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Asn-Leu-Val-Pro-Arg-Thr-Glu-Ser, sequenziamento peptidico tramite frammentazione MS/MS o degradazione di Edman che verifica ogni amminoacido (attenzione particolare ai 6 residui di Lys, 6 Arg, 4 Phe, 3 Leu critici per la struttura-attività antimicrobica), analisi della composizione amminoacidica che quantifica ogni residuo confermando la fedeltà della sequenza e la carica netta +6, saggi biochimici funzionali che misurano l'attività antimicrobica inclusi saggi di uccisione batterica utilizzando batteri Gram-positivi (S. aureus ATCC 25923, inclusi ceppi MRSA) e Gram-negativi (E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa PAO1) coltivati fino alla fase logaritmica e trattati con dosi crescenti di LL37 per 1-3 ore misurando la riduzione delle unità formanti colonia (CFU) che dimostrano un'uccisione dose-dipendente con quantificazione della concentrazione minima inibitoria (MIC) e della concentrazione minima battericida (MBC) (intervalli MIC tipici 0,5-8 μg/mL a seconda del ceppo), cinetiche di uccisione temporale che mostrano una rapida attività battericida (<1 ora per la maggior parte dei ceppi), validazione dello spettro Gram-positivi vs Gram-negativi, saggi di attività fungina utilizzando C. albicans che dimostrano la potenza antifungina, saggi di rottura della membrana utilizzando l'assorbimento di ioduro di propidio, la colorazione con SYTOX Green o il rilascio di lattato deidrogenasi che confermano che LL37 causa permeabilizzazione della membrana, saggi di rottura del biofilm che mostrano che LL37 riduce i biofilm preformati di P. aeruginosa o S. aureus misurati mediante colorazione con cristal violetto o attività metabolica (riduzione XTT), saggi di attività chemiotattica che dimostrano che LL37 recluta neutrofili o monociti utilizzando saggi di migrazione transwell con quantificazione dose-risposta, saggi di modulazione delle citochine trattando PBMC o macrofagi con LL37 +/- LPS misurando l'induzione di IL-8 e la modulazione di TNF-α tramite ELISA, saggi di neutralizzazione delle endotossine che mostrano che LL37 inibisce l'attivazione di NF-κB o la produzione di citochine indotta da LPS, spettroscopia a dicroismo circolare (CD) che conferma la formazione della struttura α-elica in ambienti mimetici della membrana (micelle SDS, vescicole fosfolipidiche) con quantificazione del contenuto elicoidale, test delle endotossine (<0,1 EU/mg tramite saggio LAL - critico per LL37 poiché viene utilizzato nella ricerca correlata a LPS) e Certificato di Analisi completo. Manipolazione del peptide cationico: la carica positiva di LL37 può causare legame aspecifico a superfici caricate negativamente (vetro, alcune plastiche); si consiglia di utilizzare provette a basso legame e di includere proteine carrier (BSA 0,1%) nelle soluzioni di lavoro per concentrazioni diluite al fine di prevenire perdite per adsorbimento superficiale.