LL37

Zawiera 37 aminokwasów, a pierwsze dwa to leucyny (L i L). Jest wycinany z większego białka zwanego hCAP18.

Jego spiralny kształt ma naładowaną stronę i tłustą stronę. Przywiera do błon bakteryjnych, które niosą więcej ładunku ujemnego niż komórki ludzkie, i przebija w nich dziury.

W badaniach laboratoryjnych rozbija biofilmy, ochronne warstwy budowane przez bakterie, i zapobiega tworzeniu się nowych.

Dziesięć zapieczętowanych fiolek liofilizowanego LL-37, po 5 mg każda, wszystkie z jednej partii. Jeden raport partii obejmuje wszystkie dziesięć.

Przechowuj zapieczętowane fiolki w temperaturze -20°C. Po rozpuszczeniu przechowuj w temperaturze od 2 do 8°C i zużyj w ciągu 14 dni.

LL37 jest wysyłany jako liofilizowany proszek w zapieczętowanych fiolkach, który pozostaje stabilny w temperaturze pokojowej podczas transportu. Każde zamówienie jest wysyłane w dyskretnym opakowaniu z możliwością śledzenia, a większość przesyłek dociera w ciągu 7 do 14 dni. Po dostarczeniu przechowuj w zamrażarce w temperaturze -20°C. Świadectwo analizy dla partii, którą obecnie wysyłamy, znajduje się na naszej stronie z wynikami laboratoryjnymi.

Nasz LL37 przekracza >98% czystości potwierdzonej wysokosprawną chromatografią cieczową z odwróconymi fazami (reverse-phase HPLC) wykazującą czas retencji charakterystyczny dla sekwencji katelicydyny złożonej z 37 aminokwasów. Każda partia przechodzi kompleksową kontrolę jakości: potwierdzenie masy cząsteczkowej (~4493 Da) za pomocą spektrometrii mas, walidujące pełną sekwencję Leu-Leu-Gly-Asp-Phe-Phe-Arg-Lys-Ser-Lys-Glu-Lys-Ile-Gly-Lys-Glu-Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Asn-Leu-Val-Pro-Arg-Thr-Glu-Ser; sekwencjonowanie peptydu za pomocą fragmentacji MS/MS lub degradacji Edmana weryfikujące każdy aminokwas (ze szczególnym uwzględnieniem 6 reszt Lys, 6 Arg, 4 Phe, 3 Leu krytycznych dla struktury i aktywności przeciwdrobnoustrojowej); analizę składu aminokwasowego określającą ilościowo każdą resztę, potwierdzającą wierność sekwencji i ładunek netto +6; funkcjonalne testy biologiczne mierzące aktywność przeciwdrobnoustrojową, w tym testy zabijania bakterii z użyciem bakterii Gram-dodatnich (S. aureus ATCC 25923, w tym szczepy MRSA) i Gram-ujemnych (E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa PAO1) hodowanych do fazy logarytmicznej i traktowanych rosnącymi dawkami LL37 przez 1-3 godziny, mierzące redukcję jednostek tworzących kolonie (CFU) wykazującą zależne od dawki zabijanie z określeniem minimalnego stężenia hamującego (MIC) i minimalnego stężenia bakteriobójczego (MBC) (typowe zakresy MIC 0,5-8 μg/mL w zależności od szczepu); kinetykę zabijania w czasie wykazującą szybkie działanie bakteriobójcze (<1 godzina dla większości szczepów); walidację spektrum działania wobec bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych; testy aktywności przeciwgrzybiczej z użyciem C. albicans wykazujące siłę przeciwgrzybiczą; testy zaburzania błon z użyciem wychwytu jodku propidyny, barwienia SYTOX Green lub uwalniania dehydrogenazy mleczanowej potwierdzające, że LL37 powoduje permeabilizację błon; testy rozbijania biofilmów wykazujące, że LL37 redukuje wcześniej utworzone biofilmy P. aeruginosa lub S. aureus mierzone barwieniem fioletem krystalicznym lub aktywnością metaboliczną (redukcja XTT); testy aktywności chemotaktycznej wykazujące, że LL37 rekrutuje neutrofile lub monocyty za pomocą testów migracji w komorze transwell z ilościowym określeniem odpowiedzi na dawkę; testy modulacji cytokin traktujące PBMC lub makrofagi LL37 +/- LPS mierzące indukcję IL-8 i modulację TNF-α za pomocą ELISA; testy neutralizacji endotoksyn wykazujące, że LL37 hamuje aktywację NF-κB lub produkcję cytokin indukowaną LPS; spektroskopię dichroizmu kołowego (CD) potwierdzającą tworzenie struktury α-helikalnej w środowiskach imitujących błony (micelle SDS, pęcherzyki fosfolipidowe) z ilościowym określeniem zawartości helisy; testy na obecność endotoksyn (<0,1 EU/mg za pomocą testu LAL – krytyczne dla LL37, ponieważ jest używany w badaniach związanych z LPS); oraz kompleksowe świadectwo analizy. Postępowanie z peptydem kationowym: dodatni ładunek LL37 może powodować niespecyficzne wiązanie z ujemnie naładowanymi powierzchniami (szkło, niektóre tworzywa sztuczne); zalecamy stosowanie probówek o niskim wiązaniu i dodawanie białek nośnikowych (0,1% BSA) do roztworów roboczych przy niskich stężeniach, aby zapobiec stratom spowodowanym adsorpcją powierzchniową.