De analysemethoden achter elk certificaat

Scheidt het doelpeptide van procesverontreinigingen op basis van hydrofobiciteit en rapporteert de zuiverheid als percentage van het totale piekoppervlak bij een vaste detectiegolflengte.

Bevestigt identiteit door de moleculaire massa van het geëlueerde materiaal te meten en te vergelijken met de theoretische massa van de sequentie.

Watergehalte van de gevriesdroogde vaste stof, door titratie in plaats van door droogteverlies.

Endotoxinebelasting, in endotoxine-eenheden per milligram, door middel van de Limulus-amebocytenlysaattest, meestal de kinetische chromogene variant.

Scheidt op schijnbaar molecuulgewicht op een gel en wordt gebruikt voor de grotere eiwitten in de catalogus waarbij een reversed-phase-kolom het molecuul zou denatureren.

Aggregaat en hoogmoleculaire deeltjes, gerapporteerd als monomeergehalte. Voor een gevouwen eiwit is dit, niet het omgekeerde-fase-oppervlak, het relevante zuiverheidscijfer.

Gehalte aan sporenelementen, waaronder zware metalen en, waar een peptide als metaalcomplex wordt geleverd, het beoogde metaal zelf.

Tegeniongehalte, typisch acetaat of trifluoracetaat dat overblijft na zuivering.

Vluchtig organisch oplosmiddel dat is overgedragen uit synthese en zuivering, door middel van headspace-gaschromatografie.

Peptide- of eiwitconcentratie, gehalte aan vrije thiolgroepen, totaal stikstof en pH. Dit zijn de bepalingen die een oppervlaktepercentage omzetten in een werkelijke hoeveelheid materiaal.

Biologische activiteit in een cel- of bindingssysteem, gebruikt waar de waarde van een molecuul afhangt van het feit dat het iets doet in plaats van alleen aanwezig en zuiver te zijn.

Uiterlijk van de gevriesdroogde cake en van de gereconstitueerde oplossing, en het aantal subzichtbare deeltjes waar van toepassing.

Welke analytische methoden worden gebruikt om onderzoekspeptiden te testen?

Omgekeerde-fase HPLC voor zuiverheid, massaspectrometrie voor identiteit en Karl Fischer-titratie voor watergehalte zijn de drie kernmethoden voor een synthetisch peptide. Bacteriële endotoxinen via LAL, uiterlijk, pH en verwante stoffen worden routinematig toegevoegd. Grotere eiwitten gaan naar SDS-PAGE en grootte-uitsluitings-HPLC omdat omgekeerde-fase-omstandigheden ze denatureren, en metaalcomplexen voegen elementanalyse toe via ICP.

Betekent een hoog HPLC-zuiverheidsresultaat dat de flacon die hoeveelheid peptide bevat?

Nee, en dit is het meest verkeerd begrepen getal in het veld. HPLC-reinheid is een oppervlaktepercentage: de piek van het doelproduct als aandeel van alles wat de detector zag. Water, zout en tegenion absorberen niet bij de detectiegolflengte, dus die tellen niet mee in die berekening. Een flacon kan voor 99 procent zuiver zijn volgens HPLC en toch een aanzienlijk deel water en acetaat bevatten op basis van massa, daarom zijn het watergehalte en het tegeniongehalte afzonderlijke bepalingen op hetzelfde certificaat.

Is het testlaboratorium ISO 17025 geaccrediteerd?

Bevestigingsanalyse wordt uitgevoerd bij een laboratorium met ISO/IEC 17025-accreditatie, de internationale norm voor de competentie van testlaboratoria. Het is de moeite waard om te weten hoe die norm werkt: deze wordt toegekend aan laboratoria, niet aan leveranciers, dus een verkoper die zelf beweert 17025-geaccrediteerd te zijn, beschrijft iets dat niet bestaat, tenzij het een eigen geaccrediteerd laboratorium exploiteert. Wat telt is de accreditatie van het laboratorium dat het werk uitvoert, de scope ervan, en of het certificaatnummer kan worden gecontroleerd bij de verstrekkende instantie. Alle drie worden gepubliceerd op de kwaliteits- en testpagina.

Wat betekent een specificatiekolom op een analysecertificaat?

Het is de limiet die vóór het uitvoeren van het monster is overeengekomen. Een resultaat is alleen betekenisvol tegen een specificatie, omdat de specificatie bepaalt of het resultaat een voldoende of onvoldoende is, niet slechts een getal. Een certificaat dat resultaten rapporteert zonder specificatiekolom heeft niets getest, het heeft slechts gemeten.

Waarom verschillen de testpanelen tussen verbindingen?

Omdat de methode moet passen bij het molecuul. Het uitvoeren van een reversed-phase-gradiënt op een gevouwen eiwit denatureert het, dus het zuiverheidscijfer zou betekenisloos zijn; monomeergehalte door grootte-uitsluiting is in plaats daarvan de juiste maat. Een kopergebonden peptide heeft elementanalyse nodig die een gewoon peptide niet nodig heeft. Een identiek panel voor elk product in een catalogus is een teken dat het panel is ontworpen voor uiterlijk in plaats van voor de chemie.