Die Analysemethoden hinter jedem Zertifikat

Trennt das Zielpeptid von Prozessverunreinigungen durch Hydrophobie und gibt die Reinheit als Prozentsatz der gesamten Peakfläche bei einer festen Detektionswellenlänge an.

Bestätigt die Identität durch Messung der Molekülmasse des eluierten Materials und Vergleich mit der theoretischen Masse der Sequenz.

Wassergehalt des lyophilisierten Feststoffs, durch Titration statt durch Trocknungsverlust.

Endotoxinbelastung in Endotoxin-Einheiten pro Milligramm, bestimmt durch Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test, in der Regel die kinetisch-chromogene Variante.

Trennt nach scheinbarem Molekulargewicht auf einem Gel und wird für die größeren Proteine im Katalog verwendet, bei denen eine Umkehrphasensäule das Molekül denaturieren würde.

Aggregate und hochmolekulare Spezies, angegeben als Monomergehalt. Für ein gefaltetes Protein ist dies, nicht die Umkehrphasen-Fläche, die aussagekräftige Reinheitszahl.

Spurenmetallgehalt, einschließlich Schwermetallen und, wo ein Peptid als Metallkomplex geliefert wird, das vorgesehene Metall selbst.

Gegenionengehalt, typischerweise Acetat oder Trifluoracetat, das von der Reinigung übrig bleibt.

Flüchtiges organisches Lösungsmittel, das aus Synthese und Reinigung mitgeführt wird, mittels Headspace-Gaschromatographie.

Peptid- oder Proteinkonzentration, Gehalt an freien Thiolgruppen, Gesamtstickstoff und pH-Wert. Dies sind die Bestimmungen, die aus einem Flächenprozent eine tatsächliche Materialmenge machen.

Biologische Aktivität in einem Zell- oder Bindungsassay, verwendet, wenn der Wert eines Moleküls davon abhängt, dass es etwas tut, nicht nur vorhanden und rein ist.

Aussehen des lyophilisierten Kuchens und der rekonstituierten Lösung sowie subvisible Partikelzahl, sofern zutreffend.

Welche Analysemethoden werden zur Prüfung von Forschungspeptiden eingesetzt?

Umkehrphasen-HPLC für die Reinheit, Massenspektrometrie für die Identität und Karl-Fischer-Titration für den Wassergehalt sind die drei Kernmethoden für ein synthetisches Peptid. Bakterielle Endotoxine mittels LAL, Aussehen, pH-Wert und verwandte Substanzen werden routinemäßig ergänzt. Größere Proteine wechseln zu SDS-PAGE und Größenausschluss-HPLC, da Umkehrphasenbedingungen sie denaturieren, und Metallkomplexe ergänzen die Elementaranalyse mittels ICP.

Bedeutet ein hoher HPLC-Reinheitswert, dass das Fläschchen so viel Peptid enthält?

Nein, und dies ist die am häufigsten falsch gelesene Zahl in diesem Bereich. Die HPLC-Reinheit ist ein Flächenprozent: der Zielpeak als Anteil an allem, was der Detektor gesehen hat. Wasser, Salz und Gegenion absorbieren nicht bei der Detektionswellenlänge, daher sind sie in dieser Berechnung überhaupt nicht enthalten. Eine Durchstechflasche kann zu 99 Prozent rein laut HPLC sein und dennoch einen erheblichen Anteil an Wasser und Acetat nach Masse enthalten, weshalb der Wassergehalt und der Gegenionengehalt separate Bestimmungen auf demselben Zertifikat sind.

Ist das Prüflabor nach ISO 17025 akkreditiert?

Die Bestätigungsanalyse wird in einem Labor durchgeführt, das nach ISO/IEC 17025 akkreditiert ist, dem internationalen Standard für die Kompetenz von Prüflaboratorien. Es ist wichtig zu wissen, wie dieser Standard funktioniert: Er wird an Labore vergeben, nicht an Lieferanten. Ein Anbieter, der behauptet, selbst 17025-akkreditiert zu sein, beschreibt etwas, das es nicht gibt, es sei denn, er betreibt ein eigenes akkreditiertes Labor. Entscheidend sind die Akkreditierung des ausführenden Labors, sein Geltungsbereich und ob die Zertifikatsnummer bei der ausstellenden Stelle überprüft werden kann. Alle drei sind auf der Seite Qualität und Prüfung veröffentlicht.

Was bedeutet eine Spezifikationsspalte auf einem Analysezertifikat?

Es ist die Grenze, die vor der Messung der Probe vereinbart wurde. Ein Ergebnis ist nur im Hinblick auf eine Spezifikation aussagekräftig, denn die Spezifikation macht aus dem Ergebnis ein Bestehen oder Nichtbestehen, nicht nur eine Zahl. Ein Zertifikat, das Ergebnisse ohne Spezifikationsspalte berichtet, hat nichts getestet, sondern lediglich gemessen.

Warum unterscheiden sich die Testpakete zwischen Verbindungen?

Weil die Methode zum Molekül passen muss. Ein Umkehrphasen-Gradient bei einem gefalteten Protein denaturiert es, daher wäre seine Reinheitszahl bedeutungslos; der Monomergehalt per Größenausschluss ist stattdessen das richtige Maß. Ein kupfergebundenes Peptid benötigt eine Elementaranalyse, die ein einfaches Peptid nicht benötigt. Ein identisches Panel über jedes Produkt in einem Katalog ist ein Zeichen dafür, dass das Panel für das Erscheinungsbild und nicht für die Chemie entwickelt wurde.