PEG MGF

Gắn các chuỗi polyethylen glycol (PEG) vào một peptide hoặc protein. Các chuỗi này bảo vệ nó khỏi enzyme và làm cho nó quá lớn để thận đào thải nhanh, do đó nó tồn tại lâu hơn nhiều.

MGF tự nhiên bị phân hủy trong vòng vài phút và hoạt động tại nơi nó được tạo ra. PEG MGF mang một chuỗi PEG 40 kDa, tồn tại lâu hơn nhiều và đến được nhiều mô hơn.

Riêng chuỗi PEG đã nặng khoảng 40 kDa, trong khi MGF nặng khoảng 2.9 kDa. Cùng nhau chúng nặng khoảng 42 kDa, như chứng nhận lô hàng cho thấy.

Mười lọ kín chứa PEG MGF đông khô, mỗi lọ 2 mg, tất cả từ một lô. Một báo cáo lô hàng bao gồm tất cả mười lọ.

Giữ các lọ kín ở -20°C. Sau khi pha, giữ ở 2 đến 8°C và sử dụng trong vòng 14 ngày. Xoay nhẹ để hòa tan.

PEG MGF được vận chuyển dưới dạng bột đông khô trong lọ kín, giữ ổn định ở nhiệt độ phòng trong suốt hành trình. Mỗi đơn hàng được gửi trong bao bì trơn có mã theo dõi, và hầu hết đến nơi trong vòng 7 đến 14 ngày. Bảo quản trong tủ đông ở -20°C khi nhận được. Giấy chứng nhận phân tích cho lô hàng chúng tôi đang gửi có trên trang kết quả xét nghiệm của chúng tôi.

PEG-MGF của chúng tôi vượt quá độ tinh khiết >98% được xác nhận bằng HPLC với kiểm soát chất lượng toàn diện cho liên hợp PEG hóa. Mỗi lô trải qua: xác nhận khối lượng phân tử bằng khối phổ cho liên hợp PEG-MGF hoàn chỉnh bao gồm cả MGF (biến thể ghép nối IGF-1Ec với vùng E) và phần PEG liên kết cộng hóa trị (tổng khối lượng phân tử ~15-50 kDa tùy thuộc vào kích thước PEG - lớn hơn đáng kể so với MGF tự nhiên ~7-9 kDa), xác minh trình tự peptide xác nhận lõi MGF/IGF-1Ec với vùng E duy nhất, xác minh liên hợp PEG đo mức độ PEG hóa (số lượng chuỗi PEG gắn trên mỗi phân tử MGF) và xác nhận liên kết cộng hóa trị, HPLC thể hiện thời gian lưu thích hợp cho các loài PEG hóa (khác với MGF không liên hợp), xét nghiệm sinh học tăng sinh tế bào vệ tinh đo khả năng của PEG-MGF kích thích tăng sinh nguyên bào cơ (có thể cho thấy hiệu lực trên mỗi mol giảm so với MGF tự nhiên do khối lượng PEG và hiệu ứng không gian, nhưng thời gian tác dụng kéo dài), hoạt tính sinh học so sánh với MGF tự nhiên cho thấy tác dụng kích hoạt tế bào vệ tinh kéo dài của PEG-MGF phản ánh thời gian bán hủy kéo dài, sàng lọc nội độc tố (<0,1 EU/mg), và Giấy chứng nhận phân tích toàn diện. Độ tinh khiết >98% đảm bảo PEG hóa có thể tái lập, thời gian bán hủy kéo dài nhất quán, và kích hoạt tế bào vệ tinh tác dụng kéo dài đáng tin cậy mà không bị nhiễu từ MGF không liên hợp, PEG tự do, hoặc các sản phẩm phân hủy. Tất cả các thử nghiệm đều xác nhận cả danh tính hóa học (lõi MGF + liên hợp PEG) và hoạt tính sinh học (kích thích tế bào vệ tinh duy trì trong thời gian kéo dài so với tác dụng cấp tính của MGF tự nhiên).

Ngoài độ tinh khiết hóa học (HPLC cho thấy các dạng PEG hóa với thời gian lưu khác biệt so với MGF tự nhiên), chúng tôi thực hiện các xét nghiệm liên hợp toàn diện và xét nghiệm hoạt tính sinh học mở rộng: (1) Khối phổ - xác nhận khối lượng phân tử cho liên hợp PEG-MGF (tổng khối lượng ~15-50 kDa tùy thuộc kích thước PEG) lớn hơn đáng kể so với MGF tự nhiên (~7-9 kDa), chứng minh việc gắn PEG thành công, (2) Phân tích mức độ PEG hóa - đo số chuỗi PEG trên mỗi phân tử MGF thông qua sự thay đổi khối lượng trong khối phổ và thay đổi độ linh động trên SDS-PAGE, (3) Đặc tính vị trí liên hợp - lập bản đồ peptide xác nhận PEG gắn vào gốc lysine hoặc đầu N (không phải vùng vị trí hoạt động quan trọng cho hoạt tính sinh học), (4) Xét nghiệm tăng sinh tế bào vệ tinh mở rộng - xử lý nuôi cấy nguyên bào cơ với một liều PEG-MGF hoặc MGF tự nhiên và đo sự tăng sinh trong khoảng thời gian mở rộng (24-96h), chứng minh PEG-MGF duy trì hoạt tính sinh học lâu hơn so với sự suy giảm nhanh của MGF tự nhiên, (5) So sánh hoạt tính sinh học theo thời gian - cho thấy PEG-MGF tạo ra sự kích hoạt tế bào vệ tinh kéo dài (tế bào EdU+ Pax7+ đo ở 24h, 48h, 72h vẫn tăng cao) so với MGF tự nhiên cho thấy kích hoạt cấp tính giảm nhanh, (6) Xác nhận dược động học - trong mô hình gặm nhấm, đo nồng độ PEG-MGF trong huyết tương theo thời gian cho thấy thời gian bán hủy kéo dài (hàng giờ) so với MGF tự nhiên (<10 phút), (7) Tái tạo cơ in vivo - mô hình tổn thương cho thấy PEG-MGF với tần suất dùng giảm (2-3 lần/tuần) tạo ra sự kích hoạt tế bào vệ tinh tương đương với liều MGF tự nhiên hàng ngày, và (8) Đáp ứng liều xác lập hiệu lực so với MGF tự nhiên. CoA bao gồm xác minh PEG hóa (khối lượng phân tử khối phổ, mức độ liên hợp) và dữ liệu hoạt tính sinh học mở rộng (thời gian tăng sinh tế bào vệ tinh kéo dài) đảm bảo chức năng kích hoạt tế bào vệ tinh tác dụng kéo dài khác biệt so với tác dụng cấp tính của MGF tự nhiên.