MGF

Entrambi derivano dal gene IGF-1. L'IGF-1 maturo circola in tutto il corpo e aiuta le cellule a maturare. L'MGF è il frammento terminale di una forma di splicing muscolare, prodotto localmente dopo un carico o un danno, e mantiene in divisione le cellule precursori muscolari.

L'MGF si degrada in pochi minuti. Il PEG MGF è dotato di una lunga catena di polietilenglicole che lo protegge, prolungandone notevolmente la durata. L'MGF è adatto per segnali locali brevi; il PEG MGF è adatto per studi più lunghi.

Perché il muscolo lo produce in risposta a un carico meccanico o a un danno. Il nome deriva dal gruppo di Geoffrey Goldspink, che lo ha descritto.

Dieci flaconcini sigillati di MGF liofilizzato, da 2 mg ciascuno, tutti dello stesso lotto. Un unico rapporto di lotto copre tutti e dieci.

Conservare i flaconcini sigillati a -20°C. Una volta ricostituito, conservarlo a una temperatura compresa tra 2 e 8°C e utilizzarlo entro 14 giorni. È di breve durata in soluzione, quindi ricostituire solo quanto necessario per uno studio.

L'MGF viene spedito come polvere liofilizzata in flaconcini sigillati, che rimane stabile a temperatura ambiente durante il trasporto. Ogni ordine viene spedito in confezione anonima con tracciabilità e la maggior parte arriva entro 7-14 giorni. Una volta arrivato, conservarlo in congelatore a -20°C. Il Certificato di Analisi per il lotto che stiamo attualmente spedendo è disponibile sulla nostra pagina dei risultati di laboratorio.

Il nostro MGF supera una purezza >98% verificata tramite HPLC con un controllo qualità completo per il peptide della variante di splicing IGF-1Ec. Ogni lotto viene sottoposto a: conferma del peso molecolare mediante spettrometria di massa per l'intera sequenza MGF, inclusa l'estensione C-terminale unica del dominio E (il peso molecolare varia in base al costrutto MGF specifico, tipicamente il frammento C-terminale a lunghezza intera o bioattivo), verifica della sequenza peptidica che conferma la sequenza unica del dominio E derivata dall'inserzione di 52 paia di basi che distingue MGF dall'IGF-1Ea sistemico, HPLC che mostra un singolo picco principale con un tempo di ritenzione appropriato, saggi biologici di proliferazione delle cellule satelliti che misurano la capacità dell'MGF di stimolare l'attivazione e la proliferazione delle cellule satelliti quiescenti in colture primarie di cellule satelliti muscolari (tipicamente utilizzando mioblasti C2C12 o cellule satelliti derivate da colture primarie), dimostrando l'incremento della proliferazione rispetto ai controlli veicolo, bioattività comparativa rispetto a IGF-1 che mostra profili di potenza distinti nei saggi su cellule satelliti rispetto a miotubi differenziati, screening delle endotossine (<0,1 EU/mg) e Certificato di Analisi completo. La purezza >98% garantisce una riproducibile attivazione delle cellule satelliti, effetti consistenti sulla proliferazione dei mioblasti e una ricerca affidabile sulla rigenerazione muscolare senza interferenze da prodotti di degradazione o varianti di splicing errate. Tutti i test convalidano sia l'identità chimica (sequenza corretta del dominio E unica per MGF) sia l'attività biologica (stimolazione delle cellule satelliti), essenziali per una ricerca affidabile sulla riparazione e rigenerazione muscolare che distingue MGF da altre isoforme di IGF-1.

Oltre alla purezza chimica (HPLC, spettrometria di massa che conferma la corretta variante di splicing IGF-1Ec con la sequenza unica del dominio E), eseguiamo saggi funzionali completi: (1) Saggi di proliferazione delle cellule satellite: trattamento di cellule satellite muscolari primarie quiescenti o mioblasti C2C12 con MGF e misurazione della proliferazione tramite incorporazione di BrdU, marcatura EdU o conteggio cellulare nell'arco di 24-72 ore, dimostrando un aumento della proliferazione dose-dipendente (tipicamente 2-4 volte rispetto ai controlli veicolo a concentrazioni ottimali), (2) Saggi di attivazione delle cellule satellite: misurazione della transizione dallo stato quiescente (Pax7+/MyoD-) a quello attivato (Pax7+/MyoD+) tramite immunofluorescenza o citometria a flusso, mostrando l'attivazione indotta da MGF, (3) Tempi di differenziamento dei mioblasti: trattamento delle colture durante la transizione da proliferazione a differenziamento, mostrando che MGF mantiene lo stato proliferativo e ritarda il differenziamento rispetto a IGF-1 sistemico che promuove il differenziamento, (4) Potenza comparativa rispetto a IGF-1: test affiancati che rivelano l'attività preferenziale di MGF sulla proliferazione delle cellule satellite rispetto agli effetti di promozione del differenziamento di IGF-1 sistemico, (5) Caratterizzazione dose-risposta: determinazione dei valori EC50 per la proliferazione in tipi cellulari rilevanti, (6) Attivazione delle vie di segnalazione: Western blot che dimostrano la fosforilazione indotta da MGF delle vie PI3K-Akt e MAPK-ERK (simili a IGF-1) ma potenzialmente con cinetiche o entità distinte che riflettono il dominio E unico, e (7) Conferma dell'identità della variante di splicing: RT-PCR o sequenziamento che confermano che MGF è la isoforma IGF-1Ec e non IGF-1Ea. Il CoA include dati sulla proliferazione delle cellule satellite (aumento in volte rispetto al controllo, valori EC50) e verifica della variante di splicing, garantendo che riceviate MGF autentico e non IGF-1 sistemico. Questi saggi convalidano la caratteristica distintiva di MGF: la potente attivazione delle cellule satellite e la proliferazione dei mioblasti, distinte dagli effetti di promozione del differenziamento di IGF-1 sistemico.