PEG MGF

L'attacco di catene di polietilenglicole (PEG) a un peptide o a una proteina. Le catene lo proteggono dagli enzimi e lo rendono troppo grande per essere eliminato rapidamente dai reni, prolungandone notevolmente la durata.

L'MGF nativo si degrada in pochi minuti e agisce nel punto in cui viene prodotto. Il PEG MGF porta una catena di PEG da 40 kDa, dura molto più a lungo e raggiunge più tessuti.

La sola catena di PEG pesa circa 40 kDa, mentre l'MGF pesa circa 2,9 kDa. Insieme pesano circa 42 kDa, come indicato nel certificato del lotto.

Dieci flaconcini sigillati di PEG MGF liofilizzato, da 2 mg ciascuno, tutti dello stesso lotto. Un unico rapporto di lotto copre tutti e dieci.

Conservare i flaconcini sigillati a -20°C. Una volta ricostituito, conservarlo a una temperatura compresa tra 2 e 8°C e utilizzarlo entro 14 giorni. Agitare delicatamente per scioglierlo.

Il PEG MGF viene spedito come polvere liofilizzata in flaconcini sigillati, che rimane stabile a temperatura ambiente durante il trasporto. Ogni ordine viene spedito in imballaggio anonimo con tracciabilità e la maggior parte arriva entro 7-14 giorni. Una volta arrivato, conservarlo nel congelatore a -20°C. Il Certificato di Analisi del lotto che stiamo attualmente spedendo è disponibile sulla nostra pagina dei risultati di laboratorio.

Il nostro PEG-MGF supera una purezza >98% verificata tramite HPLC con un controllo qualità completo per il coniugato PEGilato. Ogni lotto viene sottoposto a: conferma del peso molecolare tramite spettrometria di massa per il coniugato PEG-MGF completo, inclusi sia l'MGF (variante di splicing IGF-1Ec con dominio E) che la porzione PEG legata covalentemente (peso molecolare totale ~15-50 kDa a seconda della dimensione del PEG, significativamente maggiore dell'MGF nativo ~7-9 kDa), verifica della sequenza peptidica che conferma il core MGF/IGF-1Ec con il dominio E unico, verifica della coniugazione PEG che misura il grado di PEGilazione (numero di catene PEG attaccate per molecola di MGF) e conferma i legami covalenti, HPLC che dimostra un tempo di ritenzione appropriato per la specie PEGilata (diversa dall'MGF non coniugato), saggi biologici di proliferazione delle cellule satelliti che misurano la capacità del PEG-MGF di stimolare la proliferazione dei mioblasti (può mostrare una potenza ridotta per mole rispetto all'MGF nativo a causa della massa del PEG e degli effetti sterici, ma una durata d'azione prolungata), attività biologica comparativa rispetto all'MGF nativo che mostra gli effetti prolungati di attivazione delle cellule satelliti del PEG-MGF, riflettendo l'emivita estesa, screening delle endotossine (<0,1 EU/mg) e un Certificato di Analisi completo. La purezza >98% garantisce una PEGilazione riproducibile, un'emivita estesa costante e un'affidabile attivazione a lunga durata delle cellule satelliti senza interferenze da MGF non coniugato, PEG libero o prodotti di degradazione. Tutti i test convalidano sia l'identità chimica (core MGF + coniugazione PEG) che l'attività biologica (stimolazione sostenuta delle cellule satelliti per un periodo di tempo prolungato rispetto agli effetti acuti dell'MGF nativo).

Oltre alla purezza chimica (HPLC che mostra specie PEGilate con tempo di ritenzione distinto rispetto al MGF nativo), eseguiamo test completi di coniugazione e di bioattività estesa: (1) Spettrometria di massa, che conferma il peso molecolare del coniugato PEG-MGF (massa totale ~15-50 kDa a seconda della dimensione del PEG) significativamente maggiore rispetto al MGF nativo (~7-9 kDa), dimostrando il successo dell'attacco del PEG, (2) analisi del grado di PEGilazione, che misura il numero di catene di PEG per molecola di MGF tramite variazioni di massa allo spettrometro di massa e variazioni di mobilità su SDS-PAGE, (3) caratterizzazione del sito di coniugazione, con mappatura peptidica che conferma l'attacco del PEG ai residui di lisina o all'N-terminale (non alle regioni del sito attivo critiche per la bioattività), (4) test estesi di proliferazione delle cellule satellite, trattando colture di mioblasti con una singola dose di PEG-MGF o MGF nativo e misurando la proliferazione su un periodo di tempo esteso (24-96 ore), dimostrando che il PEG-MGF mantiene la bioattività più a lungo rispetto al rapido declino del MGF nativo, (5) bioattività comparativa nel tempo, mostrando che il PEG-MGF produce un'attivazione sostenuta delle cellule satellite (cellule EdU+ Pax7+ misurate a 24, 48 e 72 ore rimangono elevate) rispetto al MGF nativo che mostra un'attivazione acuta in rapido declino, (6) validazione farmacocinetica, misurando i livelli plasmatici di PEG-MGF nel tempo in modelli di roditori, mostrando un'emivita estesa (ore) rispetto al MGF nativo (<10 min), (7) rigenerazione muscolare in vivo, con modelli di lesione che mostrano che il PEG-MGF con frequenza di dosaggio ridotta (2-3 volte a settimana) produce un'attivazione delle cellule satellite equivalente al dosaggio giornaliero di MGF nativo, e (8) curva dose-risposta che stabilisce la potenza rispetto al MGF nativo. Il CoA include la verifica della PEGilazione (peso molecolare allo spettrometro di massa, grado di coniugazione) e dati di bioattività estesa (time-course di proliferazione sostenuta delle cellule satellite) che garantiscono una funzionalità di attivazione delle cellule satellite a lunga durata, distinta dagli effetti acuti del MGF nativo.