PEG MGF

การติดสายโพลีเอทิลีนไกลคอล (PEG) เข้ากับเปปไทด์หรือโปรตีน สายโพลีเมอร์เหล่านี้จะป้องกันเปปไทด์จากเอนไซม์และทำให้มีขนาดใหญ่เกินกว่าที่ไตจะกำจัดออกได้อย่างรวดเร็ว จึงทำให้เปปไทด์คงอยู่ในร่างกายได้นานขึ้นมาก

MGF ตามธรรมชาติจะสลายตัวภายในไม่กี่นาทีและออกฤทธิ์เฉพาะบริเวณที่ถูกสร้างขึ้น ส่วน PEG MGF มีสาย PEG ขนาด 40 kDa ติดอยู่ ทำให้คงอยู่ได้นานกว่ามากและไปถึงเนื้อเยื่อได้มากขึ้น

สาย PEG เพียงอย่างเดียวมีน้ำหนักประมาณ 40 kDa ในขณะที่ MGF มีน้ำหนักประมาณ 2.9 kDa เมื่อรวมกันแล้วจะมีน้ำหนักประมาณ 42 kDa ตามที่แสดงในใบรับรองของล็อตการผลิต

ขวดปิดผนึก 10 ขวด บรรจุ PEG MGF แบบแห้งเยือกแข็ง ขวดละ 2 mg ทั้งหมดมาจากล็อตการผลิตเดียวกัน ใบรับรองผลการวิเคราะห์หนึ่งฉบับครอบคลุมทั้ง 10 ขวด

เก็บขวดที่ยังไม่เปิดใช้ที่อุณหภูมิ -20°C เมื่อผสมแล้ว ให้เก็บที่อุณหภูมิ 2 ถึง 8°C และใช้ให้หมดภายใน 14 วัน ควรเขย่าขวดเบาๆ เพื่อให้ละลาย

PEG MGF จัดส่งในรูปแบบผงแห้งเยือกแข็งในขวดปิดผนึก ซึ่งคงตัวที่อุณหภูมิห้องระหว่างการขนส่ง ทุกคำสั่งซื้อจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ธรรมดาพร้อมหมายเลขติดตาม และส่วนใหญ่จะถึงมือผู้รับภายใน 7 ถึง 14 วัน เมื่อได้รับแล้ว ให้นำไปแช่ในช่องแช่แข็งที่อุณหภูมิ -20°C ใบรับรองผลการวิเคราะห์สำหรับล็อตการผลิตที่เรากำลังจัดส่งอยู่ในขณะนี้สามารถดูได้ที่หน้า lab-results ของเรา

PEG-MGF ของเรามีความบริสุทธิ์มากกว่า 98% ซึ่งได้รับการยืนยันโดย HPLC พร้อมการควบคุมคุณภาพที่ครอบคลุมสำหรับคอนจูเกตที่ผ่านกระบวนการ PEGylation แต่ละล็อตการผลิตจะผ่านการทดสอบดังนี้ การยืนยันน้ำหนักโมเลกุลด้วยแมสสเปกโตรเมตรีสำหรับคอนจูเกต PEG-MGF ที่สมบูรณ์ ซึ่งรวมทั้ง MGF (IGF-1Ec splice variant ที่มี E domain) และหมู่ PEG ที่เชื่อมต่อด้วยพันธะโควาเลนต์ (น้ำหนักโมเลกุลรวมประมาณ 15-50 kDa ขึ้นอยู่กับขนาดของ PEG ซึ่งใหญ่กว่า MGF ตามธรรมชาติประมาณ 7-9 kDa อย่างมีนัยสำคัญ) การยืนยันลำดับเปปไทด์เพื่อยืนยันแกนกลาง MGF/IGF-1Ec ที่มี E domain ที่เป็นเอกลักษณ์ การยืนยันการเชื่อมต่อ PEG เพื่อวัดระดับของ PEGylation (จำนวนสาย PEG ที่เชื่อมต่อต่อโมเลกุล MGF) และยืนยันพันธะโควาเลนต์ HPLC ที่แสดงค่า retention time ที่เหมาะสมสำหรับสปีชีส์ที่ผ่าน PEGylation (แตกต่างจาก MGF ที่ไม่ได้เชื่อมต่อ) การทดสอบชีวภาพการเพิ่มจำนวนเซลล์แซทเทลไลท์เพื่อวัดความสามารถของ PEG-MGF ในการกระตุ้นการเพิ่มจำนวนของ myoblast (อาจแสดงศักยภาพต่อโมลที่ลดลงเมื่อเทียบกับ MGF ตามธรรมชาติเนื่องจากมวลของ PEG และผลของ steric effect แต่มีระยะเวลาการออกฤทธิ์ที่นานขึ้น) การเปรียบเทียบฤทธิ์ทางชีวภาพกับ MGF ตามธรรมชาติซึ่งแสดงให้เห็นถึงผลการกระตุ้นเซลล์แซทเทลไลท์ที่ยาวนานขึ้นของ PEG-MGF ซึ่งสะท้อนถึงครึ่งชีวิตที่ยืดเยื้อ การตรวจคัดกรองเอนโดทอกซิน (<0.1 EU/mg) และใบรับรองผลการวิเคราะห์ที่ครอบคลุม ความบริสุทธิ์มากกว่า 98% ช่วยให้มั่นใจได้ถึง PEGylation ที่สามารถทำซ้ำได้ ครึ่งชีวิตที่ยืดเยื้อที่สม่ำเสมอ และการกระตุ้นเซลล์แซทเทลไลท์ที่ออกฤทธิ์ยาวนานและเชื่อถือได้ โดยไม่มีการรบกวนจาก MGF ที่ไม่ได้เชื่อมต่อ PEG อิสระ หรือผลิตภัณฑ์ที่สลายตัว การทดสอบทั้งหมดจะตรวจสอบทั้งเอกลักษณ์ทางเคมี (แกนกลาง MGF + การเชื่อมต่อ PEG) และฤทธิ์ทางชีวภาพ (การกระตุ้นเซลล์แซทเทลไลท์อย่างต่อเนื่องในระยะเวลาที่ยาวนาน เมื่อเทียบกับผลเฉียบพลันของ MGF ตามธรรมชาติ)

นอกเหนือจากความบริสุทธิ์ทางเคมี (HPLC แสดงสปีชีส์ PEGylated ที่มีค่า retention ต่างจาก MGF ธรรมชาติ) เรายังดำเนินการทดสอบการคอนจูเกชันและฤทธิ์ทางชีวภาพแบบครอบคลุม: (1) Mass spectrometry - ยืนยันน้ำหนักโมเลกุลของ PEG-MGF conjugate (มวลรวม ~15-50 kDa ขึ้นอยู่กับขนาด PEG) ซึ่งใหญ่กว่า MGF ธรรมชาติ (~7-9 kDa) อย่างมีนัยสำคัญ แสดงให้เห็นถึงการเกาะติดของ PEG ที่ประสบความสำเร็จ (2) การวิเคราะห์ระดับ PEGylation - วัดจำนวนสาย PEG ต่อโมเลกุล MGF ผ่านการเปลี่ยนแปลงมวลจาก mass spec และการเคลื่อนที่ใน SDS-PAGE (3) การระบุตำแหน่งคอนจูเกชัน - peptide mapping ยืนยันว่า PEG เกาะที่ไลซีนเรซิดิวหรือ N-terminus (ไม่ใช่บริเวณ active site ที่สำคัญต่อฤทธิ์ทางชีวภาพ) (4) การทดสอบการเพิ่มจำนวน satellite cell แบบขยายเวลา - เลี้ยง myoblast cultures ด้วย PEG-MGF หรือ MGF ธรรมชาติขนาดเดียว แล้ววัดการเพิ่มจำนวนในช่วงเวลาต่างๆ (24-96 ชม.) แสดงให้เห็นว่า PEG-MGF คงฤทธิ์ทางชีวภาพได้นานกว่าเมื่อเทียบกับการลดลงอย่างรวดเร็วของ MGF ธรรมชาติ (5) การเปรียบเทียบฤทธิ์ทางชีวภาพตามช่วงเวลา - แสดงให้เห็นว่า PEG-MGF กระตุ้น satellite cell อย่างต่อเนื่อง (วัด EdU+ Pax7+ cells ที่ 24, 48, 72 ชม. ยังคงสูง) ในขณะที่ MGF ธรรมชาติกระตุ้นแบบเฉียบพลันแล้วลดลงอย่างรวดเร็ว (6) การตรวจสอบเภสัชจลนศาสตร์ - ในหนูทดลอง วัดระดับ PEG-MGF ในพลาสมาเมื่อเวลาผ่านไป แสดงครึ่งชีวิตที่ยาวนานขึ้น (ชั่วโมง) เทียบกับ MGF ธรรมชาติ (<10 นาที) (7) การสร้างกล้ามเนื้อใหม่ในร่างกาย - โมเดลการบาดเจ็บแสดงให้เห็นว่า PEG-MGF ที่ความถี่การให้ยาลดลง (2-3 ครั้ง/สัปดาห์) กระตุ้น satellite cell ได้เทียบเท่าการให้ MGF ธรรมชาติทุกวัน และ (8) การสร้าง dose-response เพื่อหาความแรงเมื่อเทียบกับ MGF ธรรมชาติ CoA รวมถึงการตรวจสอบ PEGylation (น้ำหนักโมเลกุลจาก mass spec ระดับคอนจูเกชัน) และข้อมูลฤทธิ์ทางชีวภาพแบบขยายเวลา (ช่วงเวลาการเพิ่มจำนวน satellite cell ที่ต่อเนื่อง) เพื่อรับประกันฟังก์ชันกระตุ้น satellite cell ที่ออกฤทธิ์ยาวนาน ซึ่งแตกต่างจากฤทธิ์เฉียบพลันของ MGF ธรรมชาติ