PEG MGF

Polega na przyłączeniu łańcuchów glikolu polietylenowego (PEG) do peptydu lub białka. Łańcuchy te chronią go przed enzymami i sprawiają, że jest zbyt duży, aby został szybko usunięty przez nerki, dzięki czemu działa znacznie dłużej.

Naturalne MGF rozpada się w ciągu kilku minut i działa w miejscu, w którym jest wytwarzane. PEG MGF zawiera łańcuch PEG o masie 40 kDa, działa znacznie dłużej i dociera do większej liczby tkanek.

Sam łańcuch PEG ma około 40 kDa, podczas gdy MGF ma około 2,9 kDa. Razem ważą około 42 kDa, co potwierdza certyfikat partii.

Dziesięć zamkniętych fiolek liofilizowanego PEG MGF, po 2 mg każda, wszystkie z jednej partii. Jeden raport partii obejmuje wszystkie dziesięć.

Zamknięte fiolki przechowuj w temperaturze -20°C. Po rozpuszczeniu przechowuj w temperaturze od 2 do 8°C i zużyj w ciągu 14 dni. Delikatnie wiruj, aby rozpuścić proszek.

PEG MGF jest wysyłane jako liofilizowany proszek w zamkniętych fiolkach, który pozostaje stabilny w temperaturze pokojowej podczas transportu. Każde zamówienie jest wysyłane w dyskretnym opakowaniu z numerem nadania, a większość przesyłek dociera w ciągu 7 do 14 dni. Po otrzymaniu przechowuj w zamrażarce w temperaturze -20°C. Certyfikat analizy dla aktualnie wysyłanej partii znajduje się na naszej stronie z wynikami laboratoryjnymi.

Nasze PEG-MGF przekracza >98% czystości potwierdzonej metodą HPLC z kompleksową kontrolą jakości dla koniugatu PEGylowanego. Każda partia przechodzi: potwierdzenie masy cząsteczkowej za pomocą spektrometrii mas dla pełnego koniugatu PEG-MGF, w tym zarówno MGF (wariant splicingowy IGF-1Ec z domeną E), jak i kowalencyjnie przyłączonej grupy PEG (całkowita masa cząsteczkowa ~15-50 kDa w zależności od wielkości PEG - znacznie większa niż natywne MGF ~7-9 kDa), weryfikację sekwencji peptydu potwierdzającą rdzeń MGF/IGF-1Ec z unikalną domeną E, weryfikację koniugacji PEG mierzącą stopień PEGylacji (liczbę łańcuchów PEG przyłączonych na cząsteczkę MGF) i potwierdzającą wiązania kowalencyjne, HPLC wykazujący odpowiedni czas retencji dla gatunku PEGylowanego (różny od nieskoniugowanego MGF), testy biologiczne proliferacji komórek satelitarnych mierzące zdolność PEG-MGF do stymulowania proliferacji mioblastów (może wykazywać zmniejszoną moc na mol w porównaniu z natywnym MGF z powodu masy PEG i efektów sterycznych, ale wydłużony czas działania), porównawczą aktywność biologiczną w stosunku do natywnego MGF wykazującą przedłużone działanie PEG-MGF aktywujące komórki satelitarne, odzwierciedlające wydłużony okres półtrwania, badanie endotoksyn (<0.1 EU/mg) oraz kompleksowy Certyfikat Analizy. Czystość >98% gwarantuje powtarzalną PEGylację, spójny wydłużony okres półtrwania oraz niezawodną, długotrwałą aktywację komórek satelitarnych bez zakłóceń ze strony nieskoniugowanego MGF, wolnego PEG lub produktów degradacji. Wszystkie testy potwierdzają zarówno tożsamość chemiczną (rdzeń MGF + koniugacja PEG), jak i aktywność biologiczną (utrzymująca się stymulacja komórek satelitarnych przez dłuższy czas w porównaniu z ostrym działaniem natywnego MGF).

Poza czystością chemiczną (HPLC wykazujące obecność form PEGylowanych o odmiennym czasie retencji w porównaniu z natywnym MGF), przeprowadzamy kompleksowe testy koniugacji i rozszerzone testy bioaktywności: (1) Spektrometria mas - potwierdzenie masy cząsteczkowej koniugatu PEG-MGF (całkowita masa ~15-50 kDa w zależności od wielkości PEG) znacznie większej niż natywnego MGF (~7-9 kDa), co dowodzi skutecznego przyłączenia PEG, (2) Analiza stopnia PEGylacji - pomiar liczby łańcuchów PEG na cząsteczkę MGF za pomocą przesunięć mas w spektrometrii mas oraz zmian w elektroforezie SDS-PAGE, (3) Charakterystyka miejsca koniugacji - mapowanie peptydowe potwierdzające przyłączenie PEG do reszt lizyny lub N-końca (nie do regionów miejsca aktywnego kluczowych dla bioaktywności), (4) Rozszerzone testy proliferacji komórek satelitarnych - traktowanie hodowli mioblastów pojedynczą dawką PEG-MGF lub natywnego MGF i pomiar proliferacji w dłuższym okresie (24-96 h), wykazujące, że PEG-MGF utrzymuje bioaktywność dłużej w porównaniu z szybkim spadkiem w przypadku natywnego MGF, (5) Porównawcza analiza bioaktywności w czasie - wykazanie, że PEG-MGF powoduje trwałą aktywację komórek satelitarnych (komórki EdU+ Pax7+ mierzone po 24 h, 48 h, 72 h pozostają podwyższone) w porównaniu z natywnym MGF, który wykazuje ostrą aktywację szybko zanikającą, (6) Walidacja farmakokinetyczna - w modelach gryzoni, pomiar poziomów PEG-MGF w osoczu w czasie wykazujący wydłużony okres półtrwania (godziny) w porównaniu z natywnym MGF (<10 min), (7) Regeneracja mięśni in vivo - modele uszkodzeń wykazujące, że PEG-MGF przy zmniejszonej częstotliwości dawkowania (2-3x/tydz.) powoduje aktywację komórek satelitarnych równoważną codziennemu podawaniu natywnego MGF, oraz (8) Zależność dawka-odpowiedź ustalająca potencjał w porównaniu z natywnym MGF. CoA obejmuje weryfikację PEGylacji (masa cząsteczkowa w spektrometrii mas, stopień koniugacji) oraz dane dotyczące rozszerzonej bioaktywności (przebieg czasowy trwałej proliferacji komórek satelitarnych), co zapewnia długo działającą funkcję aktywującą komórki satelitarne, odróżniającą się od ostrych efektów natywnego MGF.