每份證明書背後的分析方法
純度來自逆相高效液相層析，身分鑑定來自質譜儀，水分含量則來自卡爾費雪滴定法。細菌內毒素、外觀、pH值及相關物質檢測為常規項目，且檢測組合會依化學性質需求而調整。在已發布的64份報告中，共計738項個別測定，每份報告介於9至15項之間。
此頁面上的每個數據都是在網站建置時直接從已發布的證明書讀取，因此不可能描述已不再執行的檢驗項目。每種技術無法回答的問題，都會與其能回答的問題並列說明，因為這正是決定數字是否具有意義的關鍵。
測定內容與頻率
涵蓋本網站發布的 64 份證書。
| 測定 | 證書 |
|---|---|
| Elemental Impurities | 64份證書，共64份 |
| Microbial Limits | 64份證書，共64份 |
| Residual Solvents | 62份證書，共64份 |
| Bacterial Endotoxins | 61份證書，共64份 |
| Purity | 61份證書，共64份 |
| Appearance | 58份證書，共64份 |
| Water Content | 58份證書，共64份 |
| Identity | 57份證書，共64份 |
涵蓋範圍並非一致，亦不應一致。無菌性與元素分析僅於分子或其型態需要時出現，而非作為每份證書之裝飾。
逐項技術
逆相高效液相層析
60 份證書，共 64 份依疏水性將目標胜肽與製程雜質分離，並在固定偵測波長下以總波峰面積百分比報告純度。
它不會告訴你的事： 面積百分比不等於質量百分比。它表示偵測器所見中目標物所占比例，而非瓶內胜肽含量，且無法偵測在偵測波長下無吸收之物質。水、鹽及反離子對其而言不可見，因此需另行測量。
使用中的方法變體（24）
- Cation-Exchange HPLC (ninhydrin)
- Cation-exchange HPLC (210 nm, ninhydrin)
- HILIC-HPLC (ELSD)
- RP-HPLC (C18, 210 nm)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, aqueous gradient)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, ion-pair gradient)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 220 nm)
- RP-HPLC (C18, 220 nm), free ligand resolved from the metal complex
- RP-HPLC (C18, 220 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C18, 222 nm, ACN/H₂O gradient)
- RP-HPLC (C18, 254 nm, ACN/H₂O gradient)
- RP-HPLC (C18, 254 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C18, 260 nm, phosphate buffer)
- RP-HPLC (C18, 268 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 361 nm)
- RP-HPLC (C18, 361 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 445 nm)
- RP-HPLC (C18, ELSD)
- RP-HPLC (C4, 214 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C4/C8, 214 nm, TFA/ACN)
- RP-HPLC (any single impurity)
- RP-HPLC (post-column reduction)
- RP-HPLC (residual unconjugated MGF)
質譜分析
55 份證書，共 64 份透過測量溶出物質之分子量，並與序列之理論分子量比對，確認身分。
它不會告訴你的事： 它確認分子量，而非序列。由相同殘基以不同順序組成之兩種胜肽具有相同分子量，因此分子量相符為身分之強力證據，但單獨而言並非序列之證明。
使用中的方法變體（4）
- ESI-MS
- ESI-MS (Electrospray Ionisation)
- ESI-MS (L-Carnitine marker ion)
- LC-ESI-QTOF MS, PNGase F deglycosylated
卡爾費雪滴定
58 份證書，共 64 份冷凍乾燥固體的水分含量，以滴定法測定，而非乾燥減重法。
它不會告訴你的事： 它專門測量水，而非總揮發物。殘留溶劑為另一項測定，低含水量對重組後之行為表現不具任何意義。
使用中的方法變體（1）
- Karl Fischer Titration (KF)
細菌內毒素 (LAL)
61 份證書，共 64 份內毒素含量，以每毫克內毒素單位表示，透過鱟變形細胞溶解物試驗，通常為動力濁度法。
它不會告訴你的事： 內毒素並非無菌，低內毒素數值亦非無菌宣稱。它僅偵測革蘭氏陰性細菌內毒素，對真菌污染或活菌一無所知。
使用中的方法變體（2）
- Kinetic chromogenic LAL
- Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
SDS-PAGE
8 份證書，共 64 份依凝膠上的表觀分子量分離，用於目錄中較大的蛋白質，因逆相管柱會使分子變性。
它不會告訴你的事： 解析度相較於HPLC較粗糙。可顯示截短或聚集體，但無法解析緊密相關的雜質，且染色膠體的密度測定最多僅為半定量。
使用中的方法變體（7）
- SDS-PAGE (Coomassie)
- SDS-PAGE (Coomassie, reducing)
- SDS-PAGE (Silver Stain)
- SDS-PAGE (Tricine, silver stain)
- SDS-PAGE (reducing)
- SDS-PAGE, non-reduced, densitometry
- SDS-PAGE, reduced, Coomassie
尺寸排阻高效液相層析
2 份證書，共 64 份聚集體及高分子量物種，以單體含量表示。對摺疊蛋白而言，此數值而非逆相層析面積，才是具意義的純度指標。
它不會告訴你的事： 它在溶液中依尺寸分離，因此無法區分尺寸相近之兩種物種，且結果取決於流動相是否使蛋白質維持天然狀態。
使用中的方法變體（2）
- SEC-HPLC (300Å, 280 nm)
- SEC-HPLC (high molecular weight species)
元素分析
64 份證書，共 64 份微量金屬含量，包括重金屬，且若胜肽以金屬複合物形式供應，亦包含預期的金屬本身。
它不會告訴你的事： 它報告元素，而非物種。若無前置分離步驟，它無法區分結合之預期金屬與同元素之游離污染物。
使用中的方法變體（4）
- ICP-MS
- ICP-MS (USP <232>/<233>)
- ICP-OES
- ICP-OES following solid-phase removal of the intact complex
離子層析法
38 份證書，共 64 份反離子含量，通常為純化殘留之醋酸鹽或三氟乙酸鹽。
它不會告訴你的事： 反離子含量會改變稱重質量，但不影響胜肽本身之純度。報告此數值是因為它影響胜肽含量，而非因其為一般意義下之雜質。
使用中的方法變體（2）
- HPAEC-PAD
- Ion Chromatography
殘留溶劑（GC-FID）
62 份證書，共 64 份合成與純化過程中殘留的揮發性有機溶劑，以頂空進樣氣相層析檢測。
它不會告訴你的事： 僅偵測方法目標清單中的溶劑。若某溶劑不在方法中，不會回報其不存在，而是根本未檢測。
使用中的方法變體（2）
- GC-FID (USP <467>)
- Headspace GC-FID (USP <467>)
紫外光吸收與比色法測定
55 份證書，共 64 份胜肽或蛋白質濃度、游離硫醇含量、總氮與pH值。這些測定可將面積百分比轉換為實際物質含量。
它不會告訴你的事： 各項均依賴假設之消光係數或標準曲線，因此結果僅取決於該假設之準確性。它們進行定量，而非定性。
使用中的方法變體（10）
- Cation-Exchange HPLC (ninhydrin)
- Cation-exchange HPLC (210 nm, ninhydrin)
- Ellman's Assay (DTNB, 412 nm)
- Ellman's Assay (free thiols)
- Kjeldahl Method
- Lowry Assay (BSA standard)
- Potentiometry (25°C)
- UV absorbance (A280) against reference standard
- UV absorbance A₂₈₀ (ε = 1.42 mL·mg⁻¹·cm⁻¹)
- UV absorbance A₂₈₀ (ε = 1.45 mL·mg⁻¹·cm⁻¹)
生物分析與免疫分析
10 份證書，共 64 份在細胞或結合系統中之生物活性，用於分子價值取決於其功能而非僅存在且純淨之情況。
它不會告訴你的事： 活性分析的變異性遠高於層析法，結果符合規格僅代表具有活性，而非效價宣稱。
使用中的方法變體（11）
- C2C12 Myoblast Proliferation Assay
- Casein Digestion Assay (GDU)
- ELISA counter-screen, human GDF11
- ELISA counter-screen: activin B, inhibin A, BMP-2/6/9/10, GDF8, GDF11
- ELISA, immobilised human GDF-8
- ELISA, immobilised human activin A
- Ellman's Assay (DTNB, 412 nm)
- Ellman's Assay (free thiols)
- Lowry Assay (BSA standard)
- Mouse Leydig Cell Testosterone Assay (USP)
- Nb2 Cell Proliferation Assay
目視與微粒檢查
58 份證書，共 64 份冷凍乾燥餅狀物及重組溶液之外觀，以及適用時之次微米顆粒計數。
它不會告訴你的事： 外觀是檢測套組中最便宜且專一性最低的項目，僅能發現明顯問題。
使用中的方法變體（2）
- USP <788> Light Obscuration
- Visual Inspection
藥典章節，以及引用章節的意義
部分測定遵循已發表的藥典程序。若屬此類，其章節會列於證書本身的「方法」欄位中。在已發表的整套文件中，這些章節為 USP <61>, USP <71>, USP <232>, USP <467>, USP <788>.
標明章節僅表示該次測定所遵循的程序，並非聲明產品符合藥典規範，亦非藥典符合性聲明。例如，細菌內毒素在此以鱟變形細胞溶解物試驗結果報告，而非藥典符合性聲明。
依認證，簡明陳述
確認分析係於持有 ISO/IEC 17025 之實驗室執行，該標準為測試與校正實驗室能力之國際標準。值得了解該標準之運作方式，因其常遭誤解：17025 係授予實驗室，而非供應商。宣稱自身通過 17025 認證之廠商，若非營運自身之認證實驗室，即係描述不存在之事。
因此，關鍵問題在於：哪個實驗室持有認證、其認證範圍涵蓋哪些項目，以及證書編號能否向簽發機構查證。這些都公布在品質與測試頁面上，而非以標誌宣稱。
認證也不是全部答案，其餘部分刻意可驗證，無需我們多言：證書按批次發布，而非每種產品一次；每一項結果都與其被評判的規格並列；每個數字背後的方法都有名稱；獨立結果與我們自己的結果並列發布。認證標誌是能力的證據，而非數據的替代品。
常見問題
測試研究胜肽時使用哪些分析方法？
針對合成胜肽，核心三項檢測為：以高效液相層析（HPLC）測定純度、以質譜測定身分、以卡爾費雪滴定法測定水分含量。細菌內毒素（以LAL法檢測）、外觀、酸鹼值及相關物質為常規檢測項目。較大的蛋白質則改用SDS-PAGE及尺寸排除高效液相層析，因為逆相條件會使其變性；金屬複合物則需以感應耦合電漿質譜（ICP）進行元素分析。
HPLC 純度結果很高，是否代表藥瓶中含有那麼多胜肽？
不，這是該領域最容易被誤解的數字。HPLC 純度是面積百分比：目標峰佔偵測器所見總量的比例。水、鹽類和抗衡離子在偵測波長下不吸收，因此完全不在計算內。一瓶可能 HPLC 純度為 99%，但按質量計仍含有相當比例的水和醋酸鹽，這就是為何水含量和抗衡離子含量會在同一張證書上分開測定。
測試實驗室是否通過 ISO 17025 認證？
確認分析是在具有 ISO/IEC 17025 認證的實驗室進行，該認證是測試實驗室能力的國際標準。值得了解這項標準的運作方式：它是授予實驗室，而非供應商，因此若供應商宣稱自身通過 17025 認證，除非它本身營運一間經認證的實驗室，否則就是在描述不存在的事物。重要的是執行工作的實驗室之認證、其認證範圍，以及認證編號能否向發證機構查證。以上三項都公布在品質與測試頁面上。
分析證書上的規格欄位代表什麼？
這是在樣品分析前議定的限度。結果只有在對照規格時才有意義，因為規格讓結果成為合格或不合格，而不只是數字。若證書回報結果卻沒有規格欄位，等於沒有檢驗任何東西，只是做了量測。
為什麼不同化合物的測試項目會有所不同？
因為方法必須適合分子。對摺疊蛋白進行梯度沖提的逆相層析會使其變性，因此其純度數字將失去意義；此時應改以尺寸排除層析測量單體含量。銅結合胜肽需要一般胜肽不需要的元素分析。如果型錄中每一項產品的檢測組合都完全相同，那就表示該組合是為了外觀而設計，而非為了化學特性。
其餘證據
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僅供研究與實驗室使用。 分析結果描述的是作為研究參考標準供應的材料。這些結果不構成安全評估，也不構成監管核准。