各証明書の背後にある分析方法

疎水性の違いにより目的ペプチドをプロセス由来不純物から分離し、一定の検出波長における総ピーク面積に対する純度を百分率で報告します。

溶出した物質の分子量を測定し、配列の理論質量と比較することで同一性を確認します。

凍結乾燥固体の水分含量を、乾燥減量ではなく滴定により測定します。

エンドトキシン負荷。リムルスアメーバサイトリシスアッセイ（通常は動的比濁法）による、ミリグラムあたりのエンドトキシン単位。

ゲル上で見かけの分子量により分離し、逆相カラムでは変性するようなカタログ内のより大きなタンパク質に用いられます。

凝集体および高分子量種をモノマー含有量として報告します。折りたたみタンパク質の場合、これが逆相面積ではなく、意味のある純度の指標です。

重金属を含む微量金属含量、およびペプチドが金属錯体として供給される場合は、目的の金属そのものも対象とします。

対イオン含有量。通常は精製後に残る酢酸塩またはトリフルオロ酢酸塩。

合成および精製工程から持ち込まれる揮発性有機溶媒を、ヘッドスペースガスクロマトグラフィーにより測定します。

ペプチドまたはタンパク質の濃度、遊離チオール含量、全窒素、pH。これらは、面積百分率を実際の物質量に変換するための測定です。

細胞または結合系における生物学的活性。分子の価値が単に存在して純粋であることではなく、何かを行うことに依存する場合に使用されます。

凍結乾燥ケーキおよび再構成溶液の外観、ならびに該当する場合のサブビジブル粒子数。

研究用ペプチドの試験にはどのような分析手法が使用されますか？

逆相HPLCによる純度、質量分析による同定、そしてカールフィッシャー滴定による水分含有量は、合成ペプチドにとっての中核となる3つの検査です。LALによる細菌エンドトキシン、外観、pH、類縁物質が日常的に追加されます。より大きなタンパク質は、逆相条件で変性するためSDS-PAGEとサイズ排除HPLCに移行し、金属錯体はICPによる元素分析を追加します。

高いHPLC純度の結果は、バイアルにその量のペプチドが含まれていることを意味しますか？

いいえ、これはこの分野で最も誤解されている数値です。HPLC純度は面積百分率であり、検出器が捉えたすべてのものに対する対象ピークの割合です。水、塩、対イオンは検出波長で吸収しないため、その計算にはまったく含まれません。バイアルはHPLCで99%純粋であっても、質量ではかなりの割合で水分と酢酸塩を含む可能性があり、そのため水分含量と対イオン含量は同じ証明書で別々の測定として報告されます。

試験機関はISO 17025認定を受けていますか？

確認分析は、試験所の能力に関する国際規格であるISO/IEC 17025の認定を保有する試験所で実施されます。この規格の仕組みを知っておく価値があります。これはサプライヤーではなく試験所に付与されるため、17025認定を自称するベンダーは、独自の認定試験所を運営していない限り、存在しないものを説明していることになります。重要なのは、作業を行う試験所の認定、その範囲、および証明書番号が発行機関で確認できるかどうかです。これら3つはすべて、品質および試験のページに公開されています。

分析証明書の規格列は何を意味するのか？

これはサンプルを測定する前に合意された限度値です。結果は仕様に対してのみ意味を持ちます。なぜなら、仕様があるからこそ結果が合格か不合格かになり、単なる数値ではなくなるからです。仕様の列なしで結果を報告する証明書は、何も試験しておらず、単に測定しただけです。

化合物によって試験項目が異なるのはなぜですか？

メソッドは分子に適合させる必要があるからです。折りたたまれたタンパク質に逆相グラジエントを実行すると変性するため、その純度の数値は無意味になります。代わりに、サイズ排除によるモノマー含有量が正しい尺度です。銅結合ペプチドには、通常のペプチドには必要ない元素分析が必要です。カタログ内のすべての製品にわたって同一のパネルは、化学ではなく外観のためにパネルが設計されたことを示す兆候です。