모든 성적서의 기반이 되는 분석 방법
순도는 역상 HPLC, 동질성은 질량 분석, 수분 함량은 칼 피셔 적정으로 확인합니다. 세균 내독소, 외관, pH 및 관련 물질은 일상적으로 추가되며, 화학적 요구에 따라 패널이 변경됩니다. 게시된 64개의 인증서에서 738개의 개별 측정값이 있으며, 인증서당 9~15개입니다.
이 페이지의 모든 수치는 사이트가 구축될 때 게시된 인증서에서 직접 읽어온 것이므로, 더 이상 수행되지 않는 패널을 설명할 수 없습니다. 각 기법이 답할 수 없는 부분은 답할 수 있는 부분과 함께 명시되어 있습니다. 이는 숫자가 의미를 갖는지 여부를 결정하는 절반이기 때문입니다.
결정되는 내용과 빈도
이 사이트에 게시된 64 인증서 전반에 걸쳐.
| 결정 | 증명서 |
|---|---|
| Elemental Impurities | 64개 중 64개 |
| Microbial Limits | 64개 중 64개 |
| Residual Solvents | 62개 중 64개 |
| Bacterial Endotoxins | 61개 중 64개 |
| Purity | 61개 중 64개 |
| Appearance | 58개 중 64개 |
| Water Content | 58개 중 64개 |
| Identity | 57개 중 64개 |
적용 범위는 균일하지 않으며 균일해서도 안 됩니다. 무균 및 원소 분석은 분자 또는 그 제시 형태가 요구하는 경우에만 나타나며, 모든 인증서에 장식으로 나타나는 것은 아닙니다.
기법별
역상 HPLC
60 / 64개의 인증서소수성에 따라 표적 펩타이드를 공정 불순물로부터 분리하고, 고정 검출 파장에서 총 피크 면적 대비 백분율로 순도를 보고합니다.
알려주지 않는 내용: 면적 백분율은 질량 백분율이 아닙니다. 검출기가 본 것 중 얼마나 많은 양이 표적 물질인지를 나타낼 뿐, 바이알에 들어 있는 펩타이드의 양을 나타내는 것은 아니며, 검출 파장에서 흡수하지 않는 것은 볼 수 없습니다. 물, 염, 반대 이온은 보이지 않으므로 별도로 측정됩니다.
사용 중인 방법 변형(24)
- Cation-Exchange HPLC (ninhydrin)
- Cation-exchange HPLC (210 nm, ninhydrin)
- HILIC-HPLC (ELSD)
- RP-HPLC (C18, 210 nm)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, aqueous gradient)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, ion-pair gradient)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 220 nm)
- RP-HPLC (C18, 220 nm), free ligand resolved from the metal complex
- RP-HPLC (C18, 220 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C18, 222 nm, ACN/H₂O gradient)
- RP-HPLC (C18, 254 nm, ACN/H₂O gradient)
- RP-HPLC (C18, 254 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C18, 260 nm, phosphate buffer)
- RP-HPLC (C18, 268 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 361 nm)
- RP-HPLC (C18, 361 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 445 nm)
- RP-HPLC (C18, ELSD)
- RP-HPLC (C4, 214 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C4/C8, 214 nm, TFA/ACN)
- RP-HPLC (any single impurity)
- RP-HPLC (post-column reduction)
- RP-HPLC (residual unconjugated MGF)
질량 분석법
55 / 64개의 인증서용출된 물질의 분자 질량을 측정하고 서열의 이론적 질량과 비교하여 동일성을 확인합니다.
알려주지 않는 내용: 질량을 확인할 뿐 서열을 확인하지는 않습니다. 동일한 잔기로 구성된 두 펩타이드가 다른 순서로 배열되어도 무게는 같으므로 질량 일치는 동일성의 강력한 증거이지만 그 자체로 서열의 증거는 아닙니다.
사용 중인 방법 변형(4)
- ESI-MS
- ESI-MS (Electrospray Ionisation)
- ESI-MS (L-Carnitine marker ion)
- LC-ESI-QTOF MS, PNGase F deglycosylated
칼피셔 적정
58 / 64개의 인증서동결건조 고체의 수분 함량을 건조 감량이 아닌 적정으로 측정합니다.
알려주지 않는 내용: 총 휘발성 물질이 아닌 물을 구체적으로 측정합니다. 잔류 용매는 별도의 측정이며 낮은 물 수치는 재구성 후 물질이 어떻게 행동할지에 대해 아무것도 말해주지 않습니다.
사용 중인 방법 변형(1)
- Karl Fischer Titration (KF)
세균 내독소 (LAL)
61 / 64개의 인증서밀리그램당 내독소 단위로 표시되는 내독소 부하. Limulus 아메보사이트 용해물 분석, 일반적으로 동역학적 크로모겐 변형.
알려주지 않는 내용: 내독소는 무균 상태가 아니며 낮은 내독소 수치는 무균 주장이 아닙니다. 그람 음성 세균 내독소만 검출하며 진균 오염이나 생존 미생물에 대해서는 아무것도 알려주지 않습니다.
사용 중인 방법 변형(2)
- Kinetic chromogenic LAL
- Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
SDS-PAGE
8 / 64개의 인증서겔에서 겉보기 분자량에 따라 분리하며, 역상 컬럼이 분자를 변성시킬 수 있는 카탈로그 내 더 큰 단백질에 사용됩니다.
알려주지 않는 내용: HPLC에 비해 분해능이 낮습니다. 잘린 단편이나 응집체는 보여줄 수 있지만 밀접하게 관련된 불순물은 분리하지 못하며, 염색된 겔의 농도 측정은 기껏해야 반정량적입니다.
사용 중인 방법 변형(7)
- SDS-PAGE (Coomassie)
- SDS-PAGE (Coomassie, reducing)
- SDS-PAGE (Silver Stain)
- SDS-PAGE (Tricine, silver stain)
- SDS-PAGE (reducing)
- SDS-PAGE, non-reduced, densitometry
- SDS-PAGE, reduced, Coomassie
크기 배제 HPLC
2 / 64개의 인증서단량체 함량으로 보고되는 응집체 및 고분자량 종. 접힌 단백질의 경우 역상 면적이 아닌 이것이 의미 있는 순도 지표입니다.
알려주지 않는 내용: 용액 내에서 크기로 분리하므로 유사한 크기의 두 종을 구별할 수 없으며, 결과는 단백질을 자연 상태로 유지하는 이동상에 따라 달라집니다.
사용 중인 방법 변형(2)
- SEC-HPLC (300Å, 280 nm)
- SEC-HPLC (high molecular weight species)
원소 분석
64 / 64개의 인증서중금속을 포함한 미량 금속 함량 및 펩타이드가 금속 착물로 공급되는 경우 의도된 금속 자체를 포함합니다.
알려주지 않는 내용: 원소를 보고할 뿐 종(species)을 보고하지 않습니다. 분리 단계가 선행되지 않으면 결합된 의도된 금속과 동일 원소의 유리 오염물을 구별할 수 없습니다.
사용 중인 방법 변형(4)
- ICP-MS
- ICP-MS (USP <232>/<233>)
- ICP-OES
- ICP-OES following solid-phase removal of the intact complex
이온 크로마토그래피
38 / 64개의 인증서반대 이온 함량, 일반적으로 정제 과정에서 남은 아세테이트 또는 트리플루오로아세테이트.
알려주지 않는 내용: 반대 이온 함량은 칭량하는 질량을 변화시키지만 펩타이드 자체의 순도는 변화시키지 않습니다. 일반적인 의미의 불순물이 아니라 펩타이드 함량을 변화시키기 때문에 보고됩니다.
사용 중인 방법 변형(2)
- HPAEC-PAD
- Ion Chromatography
잔류 용매(GC-FID)
62 / 64개의 인증서합성 및 정제 과정에서 이월된 휘발성 유기 용매를 헤드스페이스 가스 크로마토그래피로 측정합니다.
알려주지 않는 내용: 해당 방법의 표적 목록에 있는 용매만 확인됩니다. 방법에 포함되지 않은 용매는 부재로 보고되지 않으며, 단순히 검출 대상이 아닙니다.
사용 중인 방법 변형(2)
- GC-FID (USP <467>)
- Headspace GC-FID (USP <467>)
자외선(UV) 흡광도 및 비색 분석
55 / 64개의 인증서펩타이드 또는 단백질 농도, 유리 티올 함량, 총 질소 및 pH. 이러한 측정은 면적 백분율을 실제 물질의 양으로 전환하는 결정 항목입니다.
알려주지 않는 내용: 각각은 가정된 흡광 계수 또는 표준 곡선에 의존하므로 결과는 그 가정만큼만 정확합니다. 정량은 하지만 동정은 하지 않습니다.
사용 중인 방법 변형(10)
- Cation-Exchange HPLC (ninhydrin)
- Cation-exchange HPLC (210 nm, ninhydrin)
- Ellman's Assay (DTNB, 412 nm)
- Ellman's Assay (free thiols)
- Kjeldahl Method
- Lowry Assay (BSA standard)
- Potentiometry (25°C)
- UV absorbance (A280) against reference standard
- UV absorbance A₂₈₀ (ε = 1.42 mL·mg⁻¹·cm⁻¹)
- UV absorbance A₂₈₀ (ε = 1.45 mL·mg⁻¹·cm⁻¹)
생물학적 분석 및 면역분석
10 / 64개의 인증서세포 또는 결합 시스템에서의 생물학적 활성. 분자의 가치가 단순히 존재하고 순수한 것이 아니라 무언가를 하는 데 있을 때 사용됩니다.
알려주지 않는 내용: 활성 분석은 크로마토그래피 방법보다 훨씬 더 큰 변동성을 지니며, 규격 내 결과는 활성의 증거일 뿐 효능 주장은 아닙니다.
사용 중인 방법 변형(11)
- C2C12 Myoblast Proliferation Assay
- Casein Digestion Assay (GDU)
- ELISA counter-screen, human GDF11
- ELISA counter-screen: activin B, inhibin A, BMP-2/6/9/10, GDF8, GDF11
- ELISA, immobilised human GDF-8
- ELISA, immobilised human activin A
- Ellman's Assay (DTNB, 412 nm)
- Ellman's Assay (free thiols)
- Lowry Assay (BSA standard)
- Mouse Leydig Cell Testosterone Assay (USP)
- Nb2 Cell Proliferation Assay
육안 및 입자 검사
58 / 64개의 인증서동결건조 케이크와 재구성된 용액의 외관, 그리고 해당되는 경우 아육안 입자 수.
알려주지 않는 내용: 외관은 패널에서 가장 저렴하고 가장 덜 특이적인 시험입니다. 명백한 문제만 잡아냅니다.
사용 중인 방법 변형(2)
- USP <788> Light Obscuration
- Visual Inspection
약전(藥典) 장(chapter) 및 이를 인용한다는 것의 의미
일부 측정은 공개된 약전 절차를 따릅니다. 해당되는 경우, 해당 장(chapter)은 증명서 자체의 방법 열에 명시되어 있습니다. 공개된 세트 전반에 걸쳐 해당 장은 다음과 같습니다. USP <61>, USP <71>, USP <232>, USP <467>, USP <788>.
장(chapter) 이름을 명시하는 것은 해당 측정에 대해 어떤 절차를 따랐는지를 나타냅니다. 이는 제품이 약전 규격을 충족한다는 주장이 아니며, 약전 적합성에 대한 주장도 아닙니다. 예를 들어, 세균 내독소는 약전 적합성 진술이 아닌 결과로 Limulus 아메보사이트 용해물 분석에서 보고됩니다.
명백히, 인증에 따라
확인 분석은 시험 및 교정 기관의 역량에 대한 국제 표준인 ISO/IEC 17025를 보유한 실험실에서 수행됩니다. 이 표준이 어떻게 작동하는지 아는 것이 중요합니다. 널리 잘못 인용되기 때문입니다. 17025는 공급업체가 아닌 실험실에 부여됩니다. 자체적으로 17025 인증을 받았다고 주장하는 공급업체는 자체 인증 실험실을 운영하지 않는 한 존재하지 않는 것을 설명하는 것입니다.
그래서 중요한 질문은 어느 실험실이 인증을 보유하고 있는지, 인증된 범위가 무엇을 포함하는지, 그리고 인증서 번호가 발급 기관에 확인 가능한지입니다. 이러한 사항은 로고로 주장되기보다는 품질 및 시험 페이지에 게시됩니다.
인증 기관의 공인도 완전한 해답은 아니며, 나머지는 우리의 말을 신뢰하지 않고도 의도적으로 확인할 수 있습니다. 인증서는 제품당 한 번이 아닌 배치별로 게시되며, 모든 결과는 판단 기준이 된 규격과 함께 표시되고, 각 수치 뒤의 방법이 명시되며, 독립 기관의 결과가 우리 자체 결과와 함께 게시됩니다. 공인 로고는 역량의 증거입니다. 데이터를 대체하는 것은 아닙니다.
자주 묻는 질문
연구용 펩타이드를 시험하는 데 어떤 분석 방법이 사용되나요?
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용한 순도 분석, 질량 분석법을 이용한 동정, 칼피셔 적정법을 이용한 수분 함량 측정이 합성 펩타이드의 핵심 세 가지입니다. LAL법에 의한 세균 내독소 시험, 외관, pH 및 관련 물질 시험이 일상적으로 추가됩니다. 더 큰 단백질은 역상 조건에서 변성되므로 SDS-PAGE 및 크기 배제 HPLC로 전환되며, 금속 착물은 ICP에 의한 원소 분석을 추가합니다.
높은 HPLC 순도 결과가 바이알에 그만큼의 펩타이드가 들어 있다는 것을 의미합니까?
아니요, 이것은 이 분야에서 가장 오해가 많은 숫자입니다. HPLC 순도는 면적 백분율입니다. 즉, 검출기가 본 모든 것에 대한 표적 피크의 비율입니다. 물, 염, 반대 이온은 검출 파장에서 흡수하지 않으므로 이 계산에 포함되지 않습니다. 바이알이 HPLC로 99% 순도라고 해도 질량 기준으로는 상당한 비율의 물과 아세테이트를 포함할 수 있습니다. 그래서 수분 함량과 반대 이온 함량이 동일한 인증서에 별도 측정으로 기재되는 것입니다.
시험 기관이 ISO 17025 인증을 받았습니까?
확인 분석은 시험 기관의 역량에 대한 국제 표준인 ISO/IEC 17025 인증을 보유한 기관에서 수행됩니다. 이 표준이 어떻게 작동하는지 아는 것이 중요합니다. 이는 공급업체가 아닌 기관에 부여되므로, 자체적으로 17025 인증을 받았다고 주장하는 공급업체는 자체 인증 기관을 운영하지 않는 한 존재하지 않는 것을 설명하는 것입니다. 중요한 것은 작업을 수행하는 기관의 인증, 그 범위, 그리고 인증서 번호를 발행 기관에 확인할 수 있는지 여부입니다. 세 가지 모두 품질 및 테스트 페이지에 게시되어 있습니다.
분석 증명서의 규격 열은 무엇을 의미합니까?
샘플을 분석하기 전에 합의된 한계입니다. 결과는 규격(specification)이 있어야만 의미가 있습니다. 규격이 있어야 합격/불합격이 결정되기 때문입니다. 규격 열 없이 결과만 보고하는 인증서는 아무것도 테스트한 것이 아니라 단지 측정만 한 것입니다.
화합물마다 시험 항목이 다른 이유는 무엇인가요?
방법이 분자에 적합해야 하기 때문입니다. 접힌 단백질에 역상 구배를 적용하면 변성되어 순도 수치가 의미 없어지며, 대신 크기 배제에 의한 단량체 함량이 올바른 측정입니다. 구리 결합 펩타이드에는 일반 펩타이드에는 필요하지 않은 원소 분석이 필요합니다. 카탈로그의 모든 제품에 걸쳐 동일한 패널은 화학이 아닌 외관을 위해 설계되었음을 나타내는 신호입니다.
나머지 증거
각 페이지는 동일한 질문의 한 부분에 대한 답변을 제공합니다. 어떤 페이지도 신뢰를 요구하지 않습니다.
연구 및 실험실 사용 전용입니다. 분석 결과는 연구 참조 표준으로 공급된 물질을 설명합니다. 이는 안전성 평가나 규제 승인이 아닙니다.