每份证书背后的分析方法
纯度通过反相高效液相色谱法测定，同一性通过质谱法测定，水分含量通过卡尔·费休滴定法测定。细菌内毒素、外观、pH值和有关物质为常规检测项目，检测组合会根据化学性质要求进行调整。在已发布的64份证书中，共有738项独立测定，每份证书含9至15项。
本页面上的每个数字均直接读取自已发布的证书（在网站构建时），因此它不能描述一个不再运行的检测面板。每种技术不能回答的问题都与其能回答的问题并列列出，因为正是这一半决定了数字是否有意义。
检测内容及检测频率
涵盖本网站发布的64份证书。
| 测定 | 证书 |
|---|---|
| Elemental Impurities | 64 / 64 |
| Microbial Limits | 64 / 64 |
| Residual Solvents | 62 / 64 |
| Bacterial Endotoxins | 61 / 64 |
| Purity | 61 / 64 |
| Appearance | 58 / 64 |
| Water Content | 58 / 64 |
| Identity | 57 / 64 |
覆盖范围并不统一，也不应统一。无菌性和元素分析仅在分子或其形式需要时出现，而非作为每份证书的装饰。
逐项技术
反相HPLC
60 / 64 份证书通过疏水性将目标肽与工艺杂质分离，并在固定检测波长下以总峰面积的百分比报告纯度。
它不会告诉您的内容： 面积百分比不是质量百分比。它表示检测器看到的物质中目标物的比例，而非瓶中的肽含量，并且它无法看到在检测波长下不吸收的任何物质。水、盐和反离子对它不可见，这就是为什么它们被单独测量的原因。
使用中的方法变体（24）
- Cation-Exchange HPLC (ninhydrin)
- Cation-exchange HPLC (210 nm, ninhydrin)
- HILIC-HPLC (ELSD)
- RP-HPLC (C18, 210 nm)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, aqueous gradient)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, ion-pair gradient)
- RP-HPLC (C18, 210 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 220 nm)
- RP-HPLC (C18, 220 nm), free ligand resolved from the metal complex
- RP-HPLC (C18, 220 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C18, 222 nm, ACN/H₂O gradient)
- RP-HPLC (C18, 254 nm, ACN/H₂O gradient)
- RP-HPLC (C18, 254 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C18, 260 nm, phosphate buffer)
- RP-HPLC (C18, 268 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 361 nm)
- RP-HPLC (C18, 361 nm, phosphate buffer/ACN)
- RP-HPLC (C18, 445 nm)
- RP-HPLC (C18, ELSD)
- RP-HPLC (C4, 214 nm, TFA/ACN gradient)
- RP-HPLC (C4/C8, 214 nm, TFA/ACN)
- RP-HPLC (any single impurity)
- RP-HPLC (post-column reduction)
- RP-HPLC (residual unconjugated MGF)
质谱法
55 / 64 份证书通过测量洗脱物质的分子量并将其与序列的理论质量进行比较来确认身份。
它不会告诉您的内容： 它确认质量，而非序列。由相同残基以不同顺序组成的两种肽具有相同的质量，因此质量一致是身份的有力证据，但不能单独证明序列。
使用中的方法变体（4）
- ESI-MS
- ESI-MS (Electrospray Ionisation)
- ESI-MS (L-Carnitine marker ion)
- LC-ESI-QTOF MS, PNGase F deglycosylated
卡尔·费休滴定法
58 / 64 份证书冻干固体的水分含量，采用滴定法而非干燥失重法测定。
它不会告诉您的内容： 它专门测量水，而非总挥发物。残留溶剂是单独的测定，低水含量并不能说明材料复溶后的行为。
使用中的方法变体（1）
- Karl Fischer Titration (KF)
细菌内毒素（LAL）
61 / 64 份证书内毒素负荷，以每毫克内毒素单位计，通过鲎变形细胞裂解物测定，通常为动力学显色法。
它不会告诉您的内容： 内毒素不是无菌，低内毒素值也不是无菌声明。它仅检测革兰氏阴性细菌内毒素，对真菌污染或活生物体一无所知。
使用中的方法变体（2）
- Kinetic chromogenic LAL
- Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
SDS-PAGE
8 / 64 份证书根据凝胶上的表观分子量进行分离，用于目录中较大的蛋白质，因为反相柱会使分子变性。
它不会告诉您的内容： 与HPLC相比，其分辨率较粗糙。它能显示截短或聚集体，但无法分辨紧密相关的杂质，且染色凝胶上的光密度分析充其量只是半定量。
使用中的方法变体（7）
- SDS-PAGE (Coomassie)
- SDS-PAGE (Coomassie, reducing)
- SDS-PAGE (Silver Stain)
- SDS-PAGE (Tricine, silver stain)
- SDS-PAGE (reducing)
- SDS-PAGE, non-reduced, densitometry
- SDS-PAGE, reduced, Coomassie
体积排阻HPLC
2 / 64 份证书聚集体和高分子量物质，以单体含量报告。对于折叠蛋白质，这是有意义的纯度指标，而非反相峰面积。
它不会告诉您的内容： 它在溶液中按大小分离，因此无法区分大小相近的两种物质，结果取决于流动相是否使蛋白质保持天然状态。
使用中的方法变体（2）
- SEC-HPLC (300Å, 280 nm)
- SEC-HPLC (high molecular weight species)
元素分析
64 / 64 份证书痕量金属含量，包括重金属，以及当肽以金属络合物形式提供时，目标金属本身。
它不会告诉您的内容： 它报告的是元素，而非形态。如果没有前置的分离步骤，它无法将结合的目标金属与同一元素的游离污染物区分开。
使用中的方法变体（4）
- ICP-MS
- ICP-MS (USP <232>/<233>)
- ICP-OES
- ICP-OES following solid-phase removal of the intact complex
离子色谱法
38 / 64 份证书反离子含量，通常是纯化过程中残留的醋酸盐或三氟醋酸盐。
它不会告诉您的内容： 反离子含量会改变称量的质量，但不会改变肽本身的纯度。报告它是因为它影响肽含量，而不是因为它是通常意义上的杂质。
使用中的方法变体（2）
- HPAEC-PAD
- Ion Chromatography
残留溶剂（GC-FID）
62 / 64 份证书通过顶空气相色谱法检测合成和纯化过程中残留的挥发性有机溶剂。
它不会告诉您的内容： 只能检测到方法目标列表中的溶剂。未列入方法的溶剂不会被报告为未检出，而是根本不被检测。
使用中的方法变体（2）
- GC-FID (USP <467>)
- Headspace GC-FID (USP <467>)
紫外吸收和比色测定
55 / 64 份证书肽或蛋白质浓度、游离巯基含量、总氮和pH值。这些测定将面积百分比转换为实际物质量。
它不会告诉您的内容： 每种方法都依赖于假设的消光系数或标准曲线，因此结果的好坏取决于该假设。它们进行定量，但不进行鉴定。
使用中的方法变体（10）
- Cation-Exchange HPLC (ninhydrin)
- Cation-exchange HPLC (210 nm, ninhydrin)
- Ellman's Assay (DTNB, 412 nm)
- Ellman's Assay (free thiols)
- Kjeldahl Method
- Lowry Assay (BSA standard)
- Potentiometry (25°C)
- UV absorbance (A280) against reference standard
- UV absorbance A₂₈₀ (ε = 1.42 mL·mg⁻¹·cm⁻¹)
- UV absorbance A₂₈₀ (ε = 1.45 mL·mg⁻¹·cm⁻¹)
生物测定和免疫测定
10 / 64 份证书在细胞或结合系统中的生物活性，用于分子的价值取决于其功能而非仅仅存在和纯净的情况。
它不会告诉您的内容： 活性测定比色谱法具有更大的变异性，结果在规格范围内是活性的证据，而非效能声明。
使用中的方法变体（11）
- C2C12 Myoblast Proliferation Assay
- Casein Digestion Assay (GDU)
- ELISA counter-screen, human GDF11
- ELISA counter-screen: activin B, inhibin A, BMP-2/6/9/10, GDF8, GDF11
- ELISA, immobilised human GDF-8
- ELISA, immobilised human activin A
- Ellman's Assay (DTNB, 412 nm)
- Ellman's Assay (free thiols)
- Lowry Assay (BSA standard)
- Mouse Leydig Cell Testosterone Assay (USP)
- Nb2 Cell Proliferation Assay
目视和颗粒检查
58 / 64 份证书冻干饼状物和复溶液的外观，以及适用的亚可见颗粒计数。
它不会告诉您的内容： 外观是测试组中最便宜的测试，也是特异性最低的测试。它只能发现明显的问题。
使用中的方法变体（2）
- USP <788> Light Obscuration
- Visual Inspection
药典章节，以及引用章节的含义
某些测定遵循已公布的药典方法。若属此类，则证书方法栏中会注明相应章节。在已公布的全部测定中，这些章节包括 USP <61>, USP <71>, USP <232>, USP <467>, USP <788>.
提及某一章节仅表示该测定遵循了相应程序。这并不声称产品符合药典标准，也不构成药典合规性声明。例如，细菌内毒素在此处通过鲎变形细胞溶解物测定法报告结果，而非作为药典符合性声明。
明确依据认证
确认分析在持有ISO/IEC 17025（测试和校准实验室能力的国际标准）的实验室进行。了解该标准的工作原理很有必要，因为它常被广泛误引：17025是授予实验室的，而非供应商。声称自身通过17025认证的供应商所描述的并不存在，除非其运营自己的认可实验室。
所以，关键问题是哪家实验室持有认证，其认证范围涵盖哪些内容，以及证书编号能否向颁发机构核实。这些都在质量与测试页面上公布，而不是以标志的形式宣称。
认证也不是全部答案，其余部分可以刻意核实，无需相信我们的话：证书按批次发布而非每个产品一次，每个结果都与其评判的规格并列，每个数据背后的方法都有命名，并且独立结果与我们的结果一同发布。认证标志是能力的证据，但不能替代数据。
常见问题
测试研究肽使用哪些分析方法？
反相HPLC用于纯度检测，质谱用于鉴定，卡尔·费休滴定法用于水分含量测定，这三者是合成肽的核心检测项目。细菌内毒素（LAL法）、外观、pH值及相关物质通常也会检测。较大的蛋白质则采用SDS-PAGE和体积排阻HPLC，因为反相条件会使蛋白质变性，而金属配合物则需通过ICP进行元素分析。
高HPLC纯度结果是否意味着瓶中含有那么多肽？
不，这是该领域最容易被误解的数字。HPLC纯度是面积百分比：目标峰占检测器所见所有物质的比例。水、盐和反离子在检测波长下不吸收，因此它们完全不在该计算中。一瓶样品按HPLC纯度可能为99%，但按质量计可能含有相当比例的水和乙酸盐，这就是为什么在同一证书上含水量和反离子含量是单独测定的原因。
测试实验室是否获得ISO 17025认证？
确认分析在持有ISO/IEC 17025认可（测试实验室能力的国际标准）的实验室进行。值得了解该标准如何运作：它授予实验室，而非供应商，因此声称自身通过17025认证的供应商所描述的东西是不存在的，除非它自己运营一个经认可的实验室。重要的是进行工作的实验室的认可、其范围，以及证书编号能否向发证机构核实。这三项都发布在质量和测试页面上。
分析证书上的规格列意味着什么？
这是样品运行前商定的限度。结果只有对照规格才有意义，因为规格是决定结果是合格还是不合格的关键，而不仅仅是一个数字。如果证书报告的结果没有规格列，则未测试任何内容，只是进行了测量。
为什么不同化合物的测试项目不同？
因为方法必须适合分子。对折叠的蛋白质进行反相梯度洗脱会使其变性，因此其纯度数值将毫无意义；单体含量通过体积排阻色谱法才是正确的衡量方法。含铜的肽需要普通肽不需要的元素分析。产品目录中每个产品都采用相同的检测组合，这表该组合是为外观而非化学性质设计的。
其余证据
每个页面回答同一问题的不同部分。没有哪个页面要求您盲目相信任何说法。
仅供研究及实验室使用。分析结果描述的是作为研究参考标准提供的材料。这些结果不构成安全性评估，也不代表监管批准。